北草学分折技术
■本章内容概要 第一节酶活性测定的基本知识 第二节酶活性测定方法及酶学分析的类型 第三节同工酶测定 周 第四节酶学分析在临床诊断上的应用 第五节酶活性测定最适条件的选择 遍
◼本章内容概要： 第一节 酶活性测定的基本知识 第二节 酶活性测定方法及酶学分析的类型 第三节 同工酶测定 第四节 酶学分析在临床诊断上的应用 第五节 酶活性测定最适条件的选择
■本章教学要求 1、掌握酶活性的国际单位定义，酶活性浓度的表示方法及酶活性单位 的计算公式；酶活性测定的连续监测法和定时法的概念、区别和结果 的计算方法；酶偶联反应的在酶活性测定和酶法分析代谢物中的应用： 以NAD(P)H为指示系统和色素原底物在酶活性测定中的应用。 2、熟悉酶促反应进程；酶促反应底物动力学；酶学分析在临床诊断上 的应用。 3、了解Km值、Vmax值的应用及Km和Vmax的测定；同工酶测定和 酶活性测定最适条件的选择。 围 阔
1、掌握酶活性的国际单位定义，酶活性浓度的表示方法及酶活性单位 的计算公式；酶活性测定的连续监测法和定时法的概念、区别和结果 的计算方法；酶偶联反应的在酶活性测定和酶法分析代谢物中的应用； 以NAD（P）H为指示系统和色素原底物在酶活性测定中的应用. ◼本章教学要求： 2、熟悉酶促反应进程；酶促反应底物动力学；酶学分析在临床诊断上 的应用。 3、了解Km值、Vmax值的应用及Km和Vmax的测定；同工酶测定和 酶活性测定最适条件的选择
第一节 酶活性测定的基本知识 酶活性的概念 ■i 酶活性单位 酶活性单位的计算 图 蘭 ■酶促反应进程 ■酶促反应底物动力学 麴
第一节 酶活性测定的基本知识 ◼酶活性的概念 ◼酶活性单位 ◼酶活性单位的计算 ◼酶促反应进程 ◼酶促反应底物动力学
酶活性的概念 酶活性即酶促反应速度，指在规定条件下单位时间 内底物的减少量或产物的生成量。 v=-d(S)dt或v=d(P)/dt。 底物浓度为〔S),产物浓度为〔P〕，时间为t,反应速度为V 潮 注：在实际测定酶促反应速度时，以测定单位时间内产物的 生成量为好
一、酶活性的概念 酶活性即酶促反应速度，指在规定条件下单位时间 内底物的减少量或产物的生成量。 底物浓度为〔S〕,产物浓度为〔P〕,时间为t，反应速度为v v =-d〔S〕/dt 或 v =d〔P〕/dt。 注：在实际测定酶促反应速度时，以测定单位时间内产物的 生成量为好
二、酶活性单位 ■定义：指在一定条件下使酶促反应达到某一速度 时所需要的酶量。酶活性单位是一个人为规定的标 准。 >惯用单位：酶活性测定方法的建立者所规定的单位。 >国际单位：1U指在规定条件（最适pH,最适底物浓度)下， 每分钟转化1μmol底物的酶量。单位为U/L。 >Katal单位：1 Katal指在规定条件下，每秒钟转化1mol底物的 酶量，1Kata=60×106U。 淘
二、酶活性单位 ◼定义：指在一定条件下使酶促反应达到某一速度 时所需要的酶量。酶活性单位是一个人为规定的标 准。 ➢惯用单位：酶活性测定方法的建立者所规定的单位。 ➢国际单位 ：1IU指在规定条件（最适pH，最适底物浓度）下， 每分钟转化1mol底物的酶量。单位为IU/L 。 ➢Katal单位：1Katal指在规定条件下，每秒钟转化1mol底物的 酶量，1Katal=60×106 IU
三、酶活性单位的计算 ■步骤： 明确测定方法的酶单位定义，按照酶单位 定义确定物质量、体积和时间的单位 忍 运用公式进行计算
三、酶活性单位的计算 ◼步骤： 运用公式进行计算。 明确测定方法的酶单位定义，按照酶单位 定义确定物质量、体积和时间的单位
■计算公式： 产物的增加量 每单位规定的保温时间 1000(ml) 酶单位/升 X X 每单位规定的产物增加量 实际保温时间 实际标本用量(ml) 分光光度法测定的公式： A测定一A对照)V总·106每单位规定的保温时间 酶单位/升 三 X- εLV标 实际保温时间
◼计算公式: 产物的增加量 每单位规定的保温时间 1000（ml） 酶单位/升 = —————————×——————————×———————— 每单位规定的产物增加量 实际保温时间 实际标本用量（ml） 分光光度法测定的公式： （A测定 – A对照）·V总·106 每单位规定的保温时间 酶单位/升 = —————————×———————— ·L·V标 实际保温时间
四、酶促反应进程 酶促反应进程曲线 产物|延滞期(A) C 浓度 线性期B 利 偏离线性期(C) B 龍魅 反应时间t 图7-1 酶促反应进程曲线 蘭
四、酶促反应进程 ◼ 酶促反应进程曲线
■酶量的测定： 通过酶活性测定间接测得酶的含量，因此，要准确 测定酶量，应使酶浓度（〔E))与酶促反应速度成 正比，即〔E)o∝-d〔S)/dt或〔E)∝d〔P〕/dt。 能够真正代表酶活性大小的是线性期的酶促反应速 度，即酶促反应初速度。 酶活性测定时首先要确定线性期，在此期测定反应 速度才能准确代表酶活性。 酶促反应初速度 酶活性 酶的含量
◼酶量的测定： 通过酶活性测定间接测得酶的含量，因此，要准确 测定酶量，应使酶浓度（〔E〕）与酶促反应速度成 正比，即〔E〕∝-d〔S〕/dt或〔E〕∝d〔P〕/dt。 能够真正代表酶活性大小的是线性期的酶促反应速 度，即酶促反应初速度。 酶活性测定时首先要确定线性期，在此期测定反应 速度才能准确代表酶活性。 酶促反应初速度 酶活性 酶的含量