使用廉价培养基的高产豪B一羟基丁酸酯的荧光很单胞菌A25的报道 捕要 自美国可拉斯如州分离出一株可积累聚B一孕基丁假酯HB)的南株，经鉴定确认为荧光假单胞衡P fluorescens2a5),定型为2a5。菌株最适生长温度为30C,并发现在花糖浆培养基中胞内积累大量颗 粒。细雅样品经纯化、气相色谐和聚酯核延共藏分析确定为HB,招瓶培养中，细败密度达到0。=155时， HB浓度为31g/L。在5L生物反应器内，细图干重(C最高可达32/L,图浓度22/L。B含量高达 70%,生产力可达023g/Lh. 关健河 爱光假单胞南A2a5:聚单-羟基丁酸酯(HE):糖聚：气相色谱：核磁共振分析：分批发解 1.前言 聚羟基烷基酸酯阳)为一类组成复柔的聚酯，可由多种细菌成古生菌合成。对阳队生产研究最为详 细的是产碱街属、因氨菌属，杆菌属国和假单胞菌属响。Huis如等发现在多种爱光服单胞南中，的 的生成十分普追，可在脂斯酸和其他相关物质的培养条件下合成卧。 聚-羟基丁酸酯H)为家族中最为简单的一种生物聚酯，可被多种细菌作为营养缺乏持况下的 胞内碳源储存回。都为一种可生物降解的热塑性聚酯，性质与许多现今使用的化工里料相似。由 于医药、农业和航海等领域的潜在应用价值，微生物的B生产近年来受到广泛关注。然而，推广该种聚 酯代督传统塑料的重要因素之一是其生产成本以。因此，研究使用相对康价的培养基，改透培养方法和 下游处理工艺，是十分必要的。 在研究过程中，我们自美国阿拉斯加州的土壤中分离到可产生HB的荧光很单脑菌25。此外，使用 相对豪价的配糖浆培养基取代酵母提取物，使之利于大规模培养。利用摇瓶培养和】生物反应器分批培 养，进行了配糖浆培养基的培养试验。 2,材料和方法 21南株 本次研究用到的是从美国4拉斯如土壤中分离得到的积累多聚物的菌株P.fluorescens2a5. 22培养基 将此菌株置于0摄氏度的莲糖浆培养基中培养，培养基成分还包括1,0g/几磷酸二氢钾和2.5/L瞬 酸氢二钠.用相对便宜的噬糖浆来替代比较贵的酵母粉作为隆生素和矿物质的来源。此外，？糖浆还以50% 的体积浓度川米作为碳源。再用1摩尔每毫升的氢氧化销调节出至7.0。 将事先在在含有50l培养基的2501摇瓶中培养的菌种接种至5风的生物反应器中。在25摄氏度
使用廉价培养基的高产聚β-羟基丁酸酯的荧光假单胞菌 A2a5 的报道 摘要 自美国阿拉斯加州分离出一株可积累聚β-羟基丁酸酯(PHB)的菌株，经鉴定确认为荧光假单胞菌(P. fluorescens A2a5)，定型为 A2a5。菌株最适生长温度为 30C，并发现在蔗糖浆培养基中胞内积累大量颗 粒。细胞样品经纯化、气相色谱和聚酯核磁共振分析确定为 PHB。摇瓶培养中，细胞密度达到 OD600=155 时， PHB 浓度为 31g/L。在 5L 生物反应器内，细胞干重(CDW)最高可达 32g/L，PHB 浓度 22g/L。PHB 含量高达 70%，生产力可达 0.23g/L/h。 关键词 荧光假单胞菌 A2a5；聚β-羟基丁酸酯(PHB)；蔗糖浆；气相色谱；核磁共振分析；分批发酵 1.前言 聚羟基烷基酸酯(PHA)为一类组成复杂的聚酯，可由多种细菌或古生菌合成[1]。对 PHA 生产研究最为详 细的是产碱菌属[2-4]、固氮菌属[5]、杆菌属[6]和假单胞菌属[7-9]。Huisman 等发现在多种荧光假单胞菌中，PHA 的生成十分普遍，可在脂肪酸和其他相关物质的培养条件下合成 PHA[10]。 聚β-羟基丁酸酯(PHB)为 PHA 家族中最为简单的一种生物聚酯，可被多种细菌作为营养缺乏情况下的 胞内碳源储存[11,12]。PHB 为一种可生物降解的热塑性聚酯，性质与许多现今使用的化工塑料相似[13,14]。由 于医药、农业和航海等领域的潜在应用价值，微生物的 PHB 生产近年来受到广泛关注。然而，推广该种聚 酯代替传统塑料的重要因素之一是其生产成本[17,18]。因此，研究使用相对廉价的培养基，改进培养方法和 下游处理工艺，是十分必要的[19,20]。 在研究过程中，我们自美国阿拉斯加州的土壤中分离到可产生 PHB 的荧光假单胞菌 A2a5。此外，使用 相对廉价的蔗糖浆培养基取代酵母提取物，使之利于大规模培养。利用摇瓶培养和 5l 生物反应器分批培 养，进行了蔗糖浆培养基的培养试验。 2.材料和方法 2.1 菌株 本次研究用到的是从美国阿拉斯加土壤中分离得到的积累多聚物的菌株 P. fluorescens A2a5。 2.2 培养基 将此菌株置于 20 摄氏度的蔗糖浆培养基中培养，培养基成分还包括 1.0g/L 磷酸二氢钾和 2.5g/L 磷 酸氢二钠。用相对便宜的蔗糖浆来替代比较贵的酵母粉作为维生素和矿物质的来源。此外，蔗糖浆还以 50% 的体积浓度用来作为碳源。再用 1 摩尔每毫升的氢氧化钠调节 pH 至 7.0。 将事先在在含有 50ml 培养基的 250ml 摇瓶中培养的菌种接种至 5L 的生物反应器中。在 25 摄氏度
含有3L.培养基的显生物反应器中进行扩大培养.生物反应器预先在121摄民度条件下灭菌20i,冷却， 再以体积分数1的浓度接种。 2.3Rf1 orescens2h5的鉴定 23.1形态特征 按属gee et al。.的描述对南株进行革兰氏染色。通过透射电镜观察其形态。为了用透射电镜现 察，先用用售戊二橙和1四氧化银混合闺菌细胞，进行离心。用超薄切片机制答样品的超薄切片再将其 能入之环氧树脂中，再用酯酸铀和柠檬酸督染色，最后用透射电镜检测： 23.2 Biolog革兰民染色阴性检测 采用Biolog革兰民阴性隔标仪（型号为Biolog Catalog1O11).将在生理盐水中的分离出的2a5 茵株接种于B10l0暖革兰氏阴性酶标仪中（每孔150▣l),之后再室温条作下培养24小时。在培养时段的 一些特殊时间将样品从每块版速定的孔中移出。在培养的4小时和24小时后，用浊度计测量其0值。 在培养的4至6个小时用酶标仪读数，相似度指数不小于0.75则认为是可以接受的种属鉴定。在培养的 16至24小时，相拟度指数在0.5以上侧认为是可以接受的。这两个阀值给出了程度相制的准确性， 233165r然A基因扩增 用1SrNA的通用引物对其进行Cg扩增。每个CR反应体系由5微升Ta0酶缓冲液、4微升25W 的dTP,4微升2.5M的氯化镁、各1微升0.5M的两种月物和1微升Tag南(1单位)构成，再添加去 离子水至50微升。 扩增条作设定为3个温度的稀环。P0R反应先用95摄氏度3阳n变性，随后是94摄氏度1mn包括35 个循环使其街底变性，。之后是5引摄氏度1im的退火，72摄氏度伸2m,最后是72度最终延伸10ain 完成反应。随后，用加入1B(为了便于在紫外灯下观察)的1%琼稀糖凝胶电冰对R产物进行分离. 24聚B一羟基丁酸留的提取 收集细围用10%的Ss处理。并置于100摄氏度条件下20。离心后，凝聚物经水洗、干馒，再用 氯仿提取(0摄氏度1小时)。不产HB的细胞就会经过滤而去除，经燕发能从氯仿中分离得到可溶性的 B,川甲醇洗涤两次。滤掉（杂质）置于0-0摄氏度下干燥。 25分析方法 微生物的成长的监控是测量合适燕管水稀释后通过600■条件下细胞培养的密度。剩余的噬糖是通过 苯肠硫酸法测阁的。蓖糖汁中剩余无机氮的含量是依据凯氏测氨法检测的。样品中的有机氨通过热硫酸型 化估计。细鞋干重(Q)和聚羟基丁酸酯(HB》的定量透过重量分析测定。细围浓度是由培养基中每升 的干重确定。聚羟基酸留(HB)的含量的界定是由聚羟基丁酸酯(B)浓度和细胞浓度的百分比率确 定
含有 3L 培养基的 5L 生物反应器中进行扩大培养。生物反应器预先在 121 摄氏度条件下灭菌 20min，冷却， 再以体积分数 1%的浓度接种。 2.3 P. fluorescens A2a5 的鉴定 2.3.1 形态特征 按照 Magee et al. [21]的描述对菌株进行革兰氏染色。通过透射电镜观察其形态。为了用透射电镜观 察，先用用 4%戊二醛和 1%四氧化锇混合细菌细胞，进行离心。用超薄切片机制备样品的超薄切片再将其 嵌入之环氧树脂中，再用醋酸铀和柠檬酸铅染色，最后用透射电镜检测。 2.3.2 Biolog 革兰氏染色阴性检测 采用 Biolog 革兰氏阴性酶标仪（型号为 Biolog Catalog #1011）。将在生理盐水中的分离出的 A2a5 菌株接种于 Biolog 革兰氏阴性酶标仪中（每孔 150ml），之后再室温条件下培养 24 小时。在培养时段的 一些特殊时间将样品从每块板选定的孔中移出。在培养的 4 小时和 24 小时后，用浊度计测量其 OD590 值。 在培养的 4 至 6 个小时用酶标仪读数，相似度指数不小于 0.75 则认为是可以接受的种属鉴定。在培养的 16 至 24 小时，相似度指数在 0.5 以上则认为是可以接受的。这两个阈值给出了程度相似的准确性。 2.3.3 16S rRNA 基因扩增 用 16S rRNA 的通用引物对其进行 PCR 扩增。每个 PCR 反应体系由 5 微升 Taq 酶缓冲液、4 微升 2.5mM 的 dNTP，4 微升 2.5mM 的氯化镁、各 1 微升 0.5mM 的两种引物和 1 微升 Taq 酶（1 单位）构成，再添加去 离子水至 50 微升。 扩增条件设定为 3 个温度的循环。PCR 反应先用 95 摄氏度 5min 变性，随后是 94 摄氏度 1min 包括 35 个循环使其彻底变性，之后是 51 摄氏度 1min 的退火，72 摄氏度延伸 2min，最后是 72 度最终延伸 10min 完成反应。随后，用加入 1mMEB（为了便于在紫外灯下观察）的 1 ％琼脂糖凝胶电泳对 PCR 产物进行分离。 2.4 聚β -羟基丁酸酯的提取 收集细胞用 10%的 SDS 处理，并置于 100 摄氏度条件下 20min。离心后，凝聚物经水洗、干燥，再用 氯仿提取（60 摄氏度 1 小时）。不产 PHB 的细胞就会经过滤而去除，经蒸发能从氯仿中分离得到可溶性的 PHB，用甲醇洗涤两次，滤掉（杂质）置于 60-70 摄氏度下干燥。 2.5 分析方法 微生物的成长的监控是测量合适蒸馏水稀释后通过 600nm 条件下细胞培养的密度。剩余的蔗糖是通过 苯酚硫酸法测得的。蔗糖汁中剩余无机氮的含量是依据凯氏测氮法检测的。样品中的有机氮通过热硫酸矿 化估计。细胞干重（CDW）和聚羟基丁酸酯（PHB）的定量通过重量分析测定。细胞浓度是由培养基中每升 的干重确定。聚羟基丁酸酯（PHB）的含量的界定是由聚羟基丁酸酯（PHB）浓度和细胞浓度的百分比率确 定
2.6气相色带分析 已称重（约10ag)样品与6a1酸化甲醇(1A),2=1氯仿混合，样品在具有聚四氟乙烯线纹盖的 试管中100光加格1h,冷却至室温后，如入al燕像水。则烈摇动后离心(3000×g5i).氧仿相包含 紧羟基丁酸酯(P那)甲酯转移到一个气相色游瓶中。 气相色谱在s-1890气相色游仪上完成。使用30a长Q25m直径的圆柱。样品(0,6ul)以无分莲 模式注入，氯为运载气体以每分钟0ml的流动速度。分析开始80元2i,在此基础上以每分钟8气上升 至195℃，当达到195℃后。在分析结束前维持此温度20■m。 27核磁共振分析() 核磁共振频讲由眼LK-O0分光计记录，使用5■H/户℃两用探针，以重氧伤作为溶剂。分析℃W眼 谱以辨别P国构造，记录類率为100.6配2z,将10耶样品溶于1l溶剂用于分析。 3,结果和讨论 31形布学和生理学特征 A25菌株的形态特征大体描述如下，它是一种革兰氏阴性不产生胞子的芽孢杆菌，单生或群生，可 大量积累围，并且如预期的发现细胀（图1a和©），变薄部分的电子显微照片表明纸幽分裂的类 型为分数生殖（图b)。 A2a5菌株在能糖汁培养基l7.0amd20C中的倍增时何约为6h,菌体样落培养1天后出现在琼 脂板上。群体生长初期为圆形（直径0.5-1m),光滑。表面弯曲，奶油色。培养3天后群体直径为5-8国， 微黄色并且能产生可溶解的黄色荧光色素， A2a5菌株的生理学特征如下，莲糖汁培养基用来评估成长的温度和出，菌株成长的温度范围为 15-30℃，并且最适温度位20-25℃，但是，A25南株不能在30rC以上温度生长.菌株生长的H靠围为 5,0-80。并且最适出为65-7.0。 32革兰氏阴性酶标仪整定
2.6 气相色谱分析 已称重（约 10mg）样品与 6ml 酸化甲醇（1%H2SO4），2ml 氯仿混合，样品在具有聚四氟乙烯线纹盖的 试管中 100o C 加热 1 h，冷却至室温后，加入 4ml 蒸馏水。剧烈摇动后离心(3000×g 5 min)。氯仿相包含 聚羟基丁酸酯（PHB）甲酯转移到一个气相色谱瓶中。 气相色谱在 HPSF-1890 气相色谱仪上完成，使用 30m 长 0.25mm 直径的圆柱。样品（0.6ul）以无分流 模式注入。氮为运载气体以每分钟 40ml 的流动速度。分析开始 80o C 2 min，在此基础上以每分钟 8 o C 上升 至 195o C。当达到 195o C 后，在分析结束前维持此温度 20 min。 2.7 核磁共振分析(NMR) 核磁共振频谱由 BRUAK-400 分光计记录，使用 5mm 1 H/13C 两用探针，以重氯仿作为溶剂。分析 13C NMR 谱以辨别 PHB 构造，记录频率为 100.62 MHz。将 10 mg 样品溶于 1 ml 溶剂用于分析。 3．结果和讨论 3.1 形态学和生理学特征 A2a5 菌株的形态特征大体描述如下 ，它是一种革兰氏阴性不产生孢子的芽孢杆菌，单生或群生，可 大量积累 PHB，并且如预期的发现细胞膨胀（图 1 a 和 c）。变薄部分的电子显微照片表明细胞分裂的类 型为分裂生殖(图 1b)。 A2a5 菌株在蔗糖汁培养基 pH 7.0 and 20 ◦C 中的倍增时间约为 6 h，菌体群落培养 1 天后出现在琼 脂板上，群体生长初期为圆形（直径 0.5-1mm），光滑，表面弯曲，奶油色。培养 3 天后群体直径为 5-6 mm， 微黄色并且能产生可溶解的黄色荧光色素。 A2a5 菌株的生理学特征如下，蔗糖汁培养基用来评估成长的温度和 pH，菌株成长的温度范围为 15-30o C, 并且最适温度位 20-25o C，但是，A2a5 菌株不能在 30o C 以上温度生长。菌株生长的 pH 范围为 5.0-8.0，并且最适 pH 为 6.5-7.0。 3.2 革兰氏阴性酶标仪鉴定
数据库能给出其所有的物种鉴定，依丽传统鉴定方法的当前标准和当前分类学命名法，革兰氏乳性酶 标仪的性能特征已经通过广泛的收集群体和环境微生物的数据库建立鉴定，表明25菌株与2 fluorescens.相似，其相拟指数为0,77/24h。 图1(a)P.fluorescens2a5细胞色含PB颗校的透射电镜m片，放大倍率40000g (b)Pfl0 rescens A2a5面落边蜂一个正在分裂的细数的透射电镜丽片，故大倍率50000X (e)P.fluoresce0sA2a5商落边壕包含HB颗粒的商体透射电镜盟片，枚大倍率10000I 3.316s然A基因序列分析 A25菌株的16s然A基因经过CR扩增，序列直接通过线性PCR测序方法测序，片段的总长度为1497 bp,占整个16SrXA基因的9g路，二元序列对粗表明A2a5菌株的序列与尺fluorescens相似（相似水平9g%). 而且通过生理学特征鉴定，A2a5菌株易区分于RA如tareticd同，P.weridis别和griconti网。 3.4气相色进分析 样品经S6处理后，观察到PB薄膜，在这种条件下，围的纯度和标准相符合。 表1：A25菌株与其接近的假单胞南属物种的生理学特征区别 特征 A2a5菌株 P fluorescens antarctica' meridiana' grimontii' biovar P
数据库能给出其所有的物种鉴定，依照传统鉴定方法的当前标准和当前分类学命名法，革兰氏阴性酶 标仪的性能特征已经通过广泛的收集群体和环境微生物的数据库建立鉴定，表明 A2a5 菌株与 P. fluorescens.相似，其相似指数为 0.77/24h。 图 1（a）P. fluorescens A2a5 细胞包含 PHB 颗粒的透射电镜照片，放大倍率 40000X （b）P. fluorescens A2a5 菌落边缘一个正在分裂的细胞的透射电镜照片，放大倍率 50000X (c) P. fluorescens A2a5 菌落边缘包含 PHB 颗粒的菌体透射电镜照片，放大倍率 10000X 3.3 16s rRNA 基因序列分析 A2a5 菌株的16s rRNA基因经过PCR扩增，序列直接通过线性PCR测序方法测序，片段的总长度为1497 bp，占整个16S rRNA基因的99%，二元序列对照表明A2a5菌株的序列与P.fluorescens 相似（相似水平99%）。 而且通过生理学特征鉴定，A2a5菌株易区分于P.Antarctica [28]，P.meridiana 28]和P.grimontii [29]。 3.4 气相色谱分析 样品经SDS处理后，观察到PHB薄膜，在这种条件下，PHB的纯度和标准相符合。 表 1：A2a5 菌株与其接近的假单胞菌属物种的生理学特征区别 特征 A2a5 菌株 P. fluorescens biovar F a P. antarcticab P. meridianab P. grimontiic
d-Glucosarrune nd nd Adomiol nd 1-冈拉伯糖 1一赤醇 1一鼠李糖 疏糖 cis-乌头酸 nd nd 广羟基苯乙酸 nd nd 癸二酸 nd nd 玻珀酸 + -天冬酰胺 nd 1-天冬氨酸 1一组氢酸 nd 1一亮氨酸 nd 1-瞄氨酸 1一苏氨酸 nd +,阳性：一，阴性：d,不确定 a:Data from results of Biolog GN assay. b:Data from Gundlapalli S.N.Reddy et al.[28]. c:Data fron Nader baida et al.[29]. 35℃核磁共影分析检测 通过℃的楼磁共振检测到的波讲可以证实的化学结构（图2）。在波语中除了细胞内的其他物质产 生的微瑞的谱线外还有4个类窄的高强度谱线。这4个被峰是由甲基(19.76的m:2-4),亚甲基(0.802
d-Glucosarrune - - nd nd + Adomiol - - + + nd l-阿拉伯糖 + + - - + l-赤藓醇 - - - - + l-鼠李糖 - - - - + 蔗糖 + + - - + cis-乌头酸 + + nd nd - p-羟基苯乙酸 + - nd nd + 癸二酸 - - nd nd + 琥珀酸 + + - - + l-天冬酰胺 + + - - nd l-天冬氨酸 + + - - + l-组氨酸 + + - - nd l-亮氨酸 + + - - nd l-脯氨酸 + + - - + l-苏氨酸 + + - - nd +,阳性; −, 阴性; nd, 不确定 a：Data from results of Biolog GN assay. b：Data from Gundlapalli S.N. Reddy et al. [28]. c：Data from Nader baida et al. [29]. 3.5 13C核磁共振分析检测 通过13C的核磁共振检测到的波谱可以证实PHB的化学结构（图2）。在波谱中除了细胞内的其他物质产 生的微弱的谱线外还有4个狭窄的高强度谱线。这4个波峰是由甲基(19.769 ppm; 图2-4)，亚甲基(40.802
CH3 O O-CH-CHzC ppr 180 100 140 120 100 00 Pa:图2-3》，次甲基(67.617ppm:图2-2)和现基(169.139网a:图2-1)引起的，可推断为阳的共影 谱国川。从实验数据中可以裤断P.fluorescens25以甘蓝汁为碳源时，只产生到阳这一种P. 图2.Pseudowonas fluorescens A2a5产生的多聚物的℃V贩图游，以重氢仿作为溶剂 36摇瓶发酵实验 摇瓶发醇培养基为50ml的甘花汁，培养温度2D℃。培养开始前培养基的P州调到7.0。培养8天后菌体进 入稳定期。检测细幽沫度。测的在00值为15O。得到HB的沫度是31W几。然而，其他条件不变，将培养温 度定为25℃，得判的PIB却只有20g/八，因此可以认为温度对Rf7 orescens A2a5细菌雷生产是一关键的 因素，因此温度的变化可能导致HB的产量减少
ppm; 图2-3)，次甲基(67.617 ppm; 图2-2)和羰基(169.139 ppm;图2-1)引起的，可推断为PHB的共振 谱 [30,31]。从实验数据中可以推断P. fluorescens A2a5以甘蔗汁为碳源时，只产生PHB这一种PHA。 图 2. Pseudomonas fluorescens A2a5 产生的多聚物的 13C NMR 图谱，以重氯仿作为溶剂 3.6 摇瓶发酵实验 摇瓶发酵培养基为50ml的甘蔗汁，培养温度20℃。培养开始前培养基的PH调到7.0。培养8天后菌体进 入稳定期，检测细胞浓度，测的在OD600值为150，得到PHB的浓度是31g/L。然而，其他条件不变，将培养温 度定为25℃，得到的PHB却只有20g/L。因此可以认为温度对P.fluorescens A2a5细菌PHB生产是一关键的 因素，因此温度的变化可能导致PHB的产量减少
35 30 70 60 25 号 20 10 20 10 0 0 2 Tmed间 图3，Pseudlomonas fluorescens A2a5以甘逐计为培养基在2药℃培养(51生物反应器》细围生长和 B积累曲线。每个点均为三次实验的平均值。 375L生物反应器系统的动力学研究 用包生物反应器进行培养动力学研究。培养基为甘成汁，进行分批培养，分析检测阳的积累曲线。 培养基中C清和P刊H阳的积累，以及密糖。氨的浓度曲线如图3,25℃培养4天后曲线达到了峰植，此时C最 大量是32g/L,B为22g/L,同时P图的含量达到了70作，生产率为023glh,血ism等研究发现在辛 酸商培养时富集得到的PM只有1-2。面另一荧光假单胞菌W型菌株，R1 esomnieri,可积累接近细胞 干重的的队。分批培养中得到的实验数据可以应用于分授/连续发醇以生产用， 4。结论 通过以上的量据可以适明从美国阿拉斯如州的土壤中分离得到的细商是P.fluorescens A2a5。该细菌 可以在甘莲汁为碳源生长，在碳测充足时产生高浓度的围（可达细型干重70%）。利用这些康价的培养基 生产件B可以大幅降低生产成本
图 3. Pseudomonas fluorescens A2a5 以甘蔗汁为培养基在 25 ℃培养（5l 生物反应器）细胞生长和 PHB 积累曲线。每个点均为三次实验的平均值。 3.7 5L 生物反应器系统的动力学研究 用5L生物反应器进行培养动力学研究。培养基为甘蔗汁，进行分批培养，分析检测PHB的积累曲线。 培养基中CDW和PHB的积累，以及蔗糖，氮的浓度曲线如图3。25℃培养4天后曲线达到了峰值，此时CDW最 大量是32g/L，PHB为22g/L。同时PHB的含量达到了70%，生产率为0.23 gl−1 h −1。 Huisman 等研究发现在辛 酸酯培养时富集得到的PHA只有1-2% [10]。而另一荧光假单胞菌IV型菌株，P.lemonnieri，可积累接近细胞 干重的40%的PHA。分批培养中得到的实验数据可以应用于分批/连续发酵以生产PHB。 4．结论 通过以上的数据可以证明从美国阿拉斯加州的土壤中分离得到的细菌是P.fluorescens A2a5。该细菌 可以在甘蔗汁为碳源生长，在碳源充足时产生高浓度的PHB（可达细胞干重70%）。利用这些廉价的培养基 生产PHB可以大幅降低生产成本