高致液相色谱方法及 应用 (High Performance Liquid Chromatography, HPLC
高效液相色谱方法及 应用 (High Performance Liquid Chromatography，HPLC)
、高效液相色谱法的原理 2、高效液相色谱仪 3、固定相和流动相 4、色谱分离条件选择及定性定量分析 5、高效液相色谱法的特点及应用 HP1050系列液相色谱仪
• 1、高效液相色谱法的原理 • 2、高效液相色谱仪 • 3、固定相和流动相 • 4、色谱分离条件选择及定性定量分析 • 5、高效液相色谱法的特点及应用
1、高效液相色谱法的原理 11高效液相色谱法的特点 1.1.1与经典液相色谱法比较: 高速、高效、高灵敏度、高自动化。 1.1.2与气相色谱法比较 应用范围广、更利于选择最佳分离条件且可在常 温下操作。 1.1.3高效液相色谱法的特点 (1)分离效能高(2)选择性高 (3)检测灵敏度高(4)分析速度快 适合于高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离 分析方法
1、高效液相色谱法的原理 1.1 高效液相色谱法的特点 1.1.1 与经典液相色谱法比较： 高速、高效、高灵敏度、高自动化。 1.1.2 与气相色谱法比较 应用范围广、更利于选择最佳分离条件且可在常 温下操作。 1.1.3 高效液相色谱法的特点 （1）分离效能高 （2）选择性高 （3）检测灵敏度高 （4）分析速度快 适合于高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离 分析方法
12高效液相色谱法的分类 按溶质在两相分离过程中的物理化学原理分类 121吸附色谱( Adsorption Chromatography) 122分配色谱( Partition Chromatography 123离子色谱( lon Chromatography) 124体积排阻色谱( Size Exclusion Chromatography 125亲和色谱( Affinity Chromatography)
1.2 高效液相色谱法的分类 按溶质在两相分离过程中的物理化学原理分类 1.2.1 吸附色谱（Adsorption Chromatography） 1.2.2 分配色谱（Partition Chromatography） 1.2.3 离子色谱（Ion Chromatography） 1.2.4 体积排阻色谱（Size Exclusion Chromatography） 1.2.5 亲和色谱（Affinity Chromatography）
分离过程物理化学原理分类的各种液相色 谱法的比较 吸附色分配色离子色谱体积排阻色亲和色谱 谱谱(键(离子交谱(凝胶) 和相)|换) 固定相全多孔固定液高效微粒具有不同孔多种不同性 固体吸载帶在离子交换径的多孔性能的配位体 附剂固相基凝胶 键联在固相 体上 基体上 流动相不同极不同极不同pH有机溶郭或不同pH值的 性有机性有机值的缓冲一定pH值缓冲溶液, 溶剂溶剂和溶液的缓冲溶液可加入改性 水 剂 分离原吸附与溶解与可逆性的多孔凝胶的具有锁是结 理 解吸挥发离子交换渗透或过滤构络合物的 可逆性离解
分离过程物理化学原理分类的各种液相色 谱法的比较 吸附色 谱 分配色 谱（键 和相） 离子色谱 （离子交 换） 体积排阻色 谱（凝胶） 亲和色谱 固定相 全多孔 固体吸 附剂 固定液 载带在 固相基 体上 高效微粒 离子交换 剂 具有不同孔 径的多孔性 凝胶 多种不同性 能的配位体 键联在固相 基体上 流动相 不同极 性有机 溶剂 不同极 性有机 溶剂和 水 不同pH 值的缓冲 溶液 有机溶剂或 一定pH值 的缓冲溶液 不同pH值的 缓冲溶液， 可加入改性 剂 分离原 理 吸附与 解吸 溶解与 挥发 可逆性的 离子交换 多孔凝胶的 渗透或过滤 具有锁匙结 构络合物的 可逆性离解
13基本原理 1.31色谱过程:塔板理论、速率理论、定 量定性方法。 1.32色谱峰展宽的因素 (1)柱内展宽1涡流扩散A。2纵向扩散 B/u。3传质阻力cu。 (2)柱外展宽:降低柱效的重要原因
1.3 基本原理 1.3.1 色谱过程 ：塔板理论、速率理论、定 量定性方法。 1.3.2 色谱峰展宽的因素 (1)柱内展宽 1.涡流扩散A。2.纵向扩散 B/u。3传质阻力Cu。 (2)柱外展宽：降低柱效的重要原因
2、高效液相色谱仪简介 ·高压输液系统:储液罐、高压输液泵、过 滤器、压力脉动阻力器及梯度洗脱装置。 进样系统:进样器,进样阀 ·分离系统:色谱柱,恒温箱。 ·检测系统记录系统:检测器、记录装置
2、 高效液相色谱仪简介 • 高压输液系统：储液罐、高压输液泵、过 滤器、压力脉动阻力器及梯度洗脱装置。 • 进样系统：进样器，进样阀。 • 分离系统：色谱柱，恒温箱。 • 检测系统记录系统：检测器、记录装置
hypodermic syringe precolumn injector pump mixing chamber fittings column solvents detecto de ta system
21高压输液系统 21.1贮液罐 212流动相脱气 (1)吹氦脱气法(2)加热回流法 3)抽真空脱气法(4)超声波脱气法 (5)在线真空脱气法 213高压输液泵 (1)恒流泵:输岀恒定体积流量的流动相 (2)恒压泵:又称气动放大泵,输出恒定压力的泵。 214输液系统的辅助设备 (1)管道过滤器(2)脉动阻尼器 21.5梯度洗脱装置 (1)低压梯度〔外梯度)(2)高压梯度(内梯度) (3)影响梯度洗脱的因素
2.1 高压输液系统 2.1.1 贮液罐 2.1.2 流动相脱气 （1）吹氦脱气法 （2）加热回流法 （3）抽真空脱气法 （4）超声波脱气法 （5）在线真空脱气法 2.1.3 高压输液泵 （1）恒流泵：输出恒定体积流量的流动相 （2）恒压泵：又称气动放大泵，输出恒定压力的泵。 2.1.4 输液系统的辅助设备 （1）管道过滤器 （2）脉动阻尼器 2.1.5 梯度洗脱装置 （1）低压梯度（外梯度） （2）高压梯度（内梯度） （3）影响梯度洗脱的因素
22进样系统 221停流进样装置 222六通阀进样装置 223自动进样器
2.2 进样系统 2.2.1 停流进样装置 2.2.2 六通阀进样装置 2.2.3 自动进样器