温州医学院 文本 荧光免疫分析系统_临床免疫学检验

见习2荧光免夜分析系统 预习要求： 1、荧光免疫分析的基本类型及其原理： 2、荧光免疫分析的影响因素： 3、荧光免疫分析的方法学评价： 见习要点： 1、了解目前国内主要统光免疫分析系统的种类： 2、熟卷荧光免夜分析系饶的技术流程： 3,掌握荧光免疫分析法的基本源理及其质量控制。 见习内容 一、 原郑 蒙光免疫分析系统是将抗原抗体的特异性反应与荧光分析及计算机技术相结合面建立 的一种全自动检测系统。该分析系统必须有能使荧光物质产生发射光的激发光，且两者波长 不同，根据反应后是否需要分离结合的与游离的荧光标记物，可将其分为均相和均相两种 类型，如需要分离者为非均相荧光免疫分析，包括时间分辨荧光免疫分析和荧光髯免疫测定： 如不需进行分离者为均相贡光免疫分析，包括茨光偏振免疫分析和底物标记英光免疫测定。 以时间分辨荧光免疫分析和荧光偏影免疫分析较具临床代表性， 1、时阅分舞荧光免变分析： 利用倒系稀土元素整合物《以销E整合物为常用)标记抗原或抗体，与待校样品中的 抗原或抗体发生免疫反应后形成免疫复合物，由于阀系稀上元素整合物是一组三价离子的特 殊荧光基团，其荧光寿命很长(10,8一1.0s),而背景荧光包括其它普通荧完素发射的英 光和血清蛋白及阳红素等物质发射的非特异荧光均属短寿命荧光，比特异性受光短3一4个 数量级，因此在检测中贝要在每个激发光脉冲过后延缓测量时间，待短寿命的背景荧光衰变 清失后，再打开取样门仪器记录长寿命”整合物发射的特异性英光，即可莲免本底荧允干 扰，提高检测的精密度。从而根据时间分辨荧光信号接收仪接受的信号强度，经计算机系统 换算成待测样品的量

见习 2 荧光免疫分析系统 预习要求： 1、 荧光免疫分析的基本类型及其原理； 2、 荧光免疫分析的影响因素； 3、 荧光免疫分析的方法学评价； 见习要点： 1、 了解目前国内主要荧光免疫分析系统的种类； 2、 熟悉荧光免疫分析系统的技术流程； 3、 掌握荧光免疫分析法的基本原理及其质量控制。 见习内容 一、 原理 荧光免疫分析系统是将抗原抗体的特异性反应与荧光分析及计算机技术相结合而建立 的一种全自动检测系统。该分析系统必须有能使荧光物质产生发射光的激发光，且两者波长 不同。根据反应后是否需要分离结合的与游离的荧光标记物，可将其分为均相和非均相两种 类型，如需要分离者为非均相荧光免疫分析，包括时间分辨荧光免疫分析和荧光酶免疫测定； 如不需进行分离者为均相荧光免疫分析，包括荧光偏振免疫分析和底物标记荧光免疫测定。 以时间分辨荧光免疫分析和荧光偏振免疫分析较具临床代表性。 1、 时间分辨荧光免疫分析： 利用镧系稀土元素螯合物（以铕 Eu3+螯合物为常用）标记抗原或抗体，与待检样品中的 抗原或抗体发生免疫反应后形成免疫复合物，由于镧系稀土元素螯合物是一组三价离子的特 殊荧光基团，其荧光寿命很长（10μs～1.0ms），而背景荧光包括其它普通荧光素发射的荧 光和血清蛋白及胆红素等物质发射的非特异荧光均属短寿命荧光，比特异性荧光短 3～4 个 数量级，因此在检测中只要在每个激发光脉冲过后延缓测量时间，待短寿命的背景荧光衰变 消失后，再打开取样门仪器记录长寿命 Eu3+螯合物发射的特异性荧光，即可避免本底荧光干 扰，提高检测的精密度，从而根据时间分辨荧光信号接收仪接受的信号强度，经计算机系统 换算成待测样品的量

®”整合物在蜀碱性反应液中发射的特异性荧光信号较函，必须出助一种增强液，使其 植降低至2~3，以使广从复合物上完全解离下米与增强液中的另一种整合剂整合，形 成新的具有高强度荧光的稳定整合物，使发射光信号增强上百万倍，从而大大提高检测敏感 度。常见仪器有[0EFIA时间分辨荧光免夜分析仪等： 2、荧光偏振免疫分断： 刊用荧光物质在溶液中被单一平面的偏振光（波长85）属射后可吸收光能进入激发 态，在同复基态后可产生另一单一平面的偏拟发射荧光（波长525面），该荧光强度与荧光 标记物质在溶液中旋转的速度与分子大小呈反比。 主要用于测定小分子药物，待测小分子抗原和荧光素标记的小分子抗原竞争结合相应特 异性抗体。当待测小分子抗原浓度高时，大部分抗体与之结合，而荧光素标记的小分子抗原 处于游离状老。因其分子小，在液相中旋转的速度较快，从而测得的荧光偏振强度也较低： 通过标准曲线经计算机系统换算可得特测小分子抗原的浓度。常见仪器有8 ITT AxSy■型 自动免疫分析仪等。 所有仪器均由样品中心，检测中心，侯位中心和数据处理中心四部分组成。 二、 标本处避及其要求 1、常规静脉采血约21，不抗凝，置普通试管中或采用含分离胶的真空采血管。室温 (15一25℃)下可稳定8h,替通冰箱中(2一8℃)稳定7d。雷较长时闻保存应将血清存政 于-0℃。为避免标本中水分挥发使血清浓绵，对保存时间超过1的标本均如嘉密闭或覆盖 湿巾。 2、特豫情况处理： 视检测项目，根据试剂说明书处理标本。 三、 技术流程 基本技术流程

Eu3+螯合物在弱碱性反应液中发射的特异性荧光信号较弱，必须借助一种增强液，使其 pH 值降低至 2～3，以使 Eu3+从复合物上完全解离下来与增强液中的另一种螯合剂螯合，形 成新的具有高强度荧光的稳定螯合物，使发射光信号增强上百万倍，从而大大提高检测敏感 度。常见仪器有 Auto DELFIA 时间分辨荧光免疫分析仪等。 2、 荧光偏振免疫分析： 利用荧光物质在溶液中被单一平面的偏振光（波长 485nm）照射后可吸收光能进入激发 态，在回复基态后可产生另一单一平面的偏振发射荧光（波长 525nm），该荧光强度与荧光 标记物质在溶液中旋转的速度与分子大小呈反比。 主要用于测定小分子药物。待测小分子抗原和荧光素标记的小分子抗原竞争结合相应特 异性抗体。当待测小分子抗原浓度高时，大部分抗体与之结合。而荧光素标记的小分子抗原 处于游离状态，因其分子小，在液相中旋转的速度较快，从而测得的荧光偏振强度也较低。 通过标准曲线经计算机系统换算可得待测小分子抗原的浓度。常见仪器有 ABBOTT AxSym 型 自动免疫分析仪等。 所有仪器均由样品中心、检测中心、供应中心和数据处理中心四部分组成。 二、 标本处理及其要求 1、常规静脉采血约 2ml，不抗凝，置普通试管中或采用含分离胶的真空采血管。室温 （15～25℃）下可稳定 48h，普通冰箱中（2～8℃）稳定 7d。需较长时间保存应将血清存放 于-20℃。为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过 1d 的标本均加塞密闭或覆盖 湿巾。 2、特殊情况处理： 视检测项目，根据试剂说明书处理标本。 三、 技术流程 基本技术流程：

开机 最仪器均24小时特机，日常工作中无需开，关机。 参数设置 设置仪器项目、报告单位和传输模式等相关参数。 试剂装酸 将试剂做入试剂险内相关位置。 校准 根据已定程序进行校准。 标本装载 将标本放入样本架，输入工作单。 标本测定 按已设定的参数和程序进行测定 结果查询与传送 按己设定的参数和程序查看并传送结果。 结果报售 以标准模式报店结果并给予解读和对临床提债建议 具体操作洋情（以B0TTA红Sm型自动免疫分析仪为例）： 1、开机 仪器一般2待机，匆需开关电源操作。 如遇特殊情况，可按以下步置开关机： 1)开机 )打开仪器电源。听到“喷”的一声，特自检后仪器初始化，进入主菜单。 b》在主菜单中选择F3(ST螺P)启动收器，预热一小时后，系统变为Rady状态即 可开始工作。 2)关机 从主菜单下选择2(SHTN),待仪器提示可以安全关机后关上仪器电源。 2、参数设置 1)软件安装设定 a启动

具体操作详情（以 ABBOTT AxSym 型自动免疫分析仪为例） ： 1、 开机 仪器一般 24h 待机，勿需开关电源操作。 如遇特殊情况，可按以下步骤开关机： 1） 开机 a) 打开仪器电源，听到“嘀”的一声，待自检后仪器初始化，进入主菜单。 b) 在主菜单中选择 F3（STAR UP）启动仪器，预热一小时后，系统变为 Ready 状态即 可开始工作。 2） 关机 从主菜单下选择 F2（SHUT DOWN），待仪器提示可以安全关机后关上仪器电源。 2、 参数设置 1）软件安装设定 a) 启动： 开机 试剂装载 标本测定 标本装载 结果查询与传送 结果报告 一般仪器均 24 小时待机，日常工作中无需开、关机。 将试剂放入试剂舱内相关位置。 以标准模式报告结果并给予解读和对临床提供建议 将标本放入样本架，输入工作单。 按已设定的参数和程序进行测定 按已设定的参数和程序查看并传送结果。 参数设置 设置仪器项目、报告单位和传输模式等相关参数。 校准 根据已定程序进行校准

从主菜单中选择CONFIGURATION进入INST山4TION菜单启动款件安装。 b)系统软件的安装： 在INSTAL山TIN菜单下选F6(INSTALL VERSI0盛)，当出现系统提示后插入新的系 统载件。选择咪，选择需安装的语言、安装程序等即可。 c)分析软件的安装： 在INSTAI山ATI0N菜单下，插入AxSV分析软件，选择F2(SCAN DISE),选择需安装 的分析项目按3健安装。 》分析比率的定义： 在CONFIGURATI0W菜单下进入ATID菜单，选择要定义的分析比率、需要的规则保 存即可， 3》分析项目显示顺序的定义： 从主柔单中选择CONF1G家4T1ON进入DI5F4Y0成菜单，按F3 WE CURS0R)将 光标移到所要插入项目的地方，按空格键插入。 4)建立一个分析组合 从主菜单中选释CONFIGURAT1ON进入P包要单，输入一个新的分析组合名，最多7 个字母，选择该组合的分析项目28个，选择F4(ADD PANE)储存新的组合， 3、试剂装载 将己经定过标的测定试剂金收在仪器试剂栏中， 4、校准 试剂为批特异性，。更换试剂批号成质控失控时需重新定标， 》从主装单进入OE阻IST菜单透择下4(C),选择要定标的分析项目，输入样品栏 的位置。输入标准品的批号和效期。 2)选择定标类型：Index Cal,Master Cal或Standard Cal定标。 3)垂直滴加标准品到样品杯中置于相对应的样品栏中，按X,仪器白动进行定标并 储存标准曲线。 5、标木装数及测定 1》工作单编入 从主菜单进入OE1ST菜单选释F花PAT1ET),输入样品栏的位置编号，输入样品编 号，选择测试项目，确认申请

从主菜单中选择 CONFIGURATION 进入 INSTALLATION 菜单启动软件安装。 b) 系统软件的安装： 在 INSTALLATION 菜单下选 F6（INSTALL VERSION）， 当出现系统提示后插入新的系 统软件，选择 OK，选择需安装的语言、安装程序等即可。 c) 分析软件的安装： 在 INSTALLATION 菜单下，插入 AxSYM 分析软件，选择 F2(SCAN DISK)，选择需安装 的分析项目按 F3 键安装。 2) 分析比率的定义： 在 CONFIGURATION 菜单下进入 RATIO 菜单，选择要定义的分析比率、需要的规则保 存即可。 3) 分析项目显示顺序的定义： 从主菜单中选择 CONFIGURATION 进入 DISPLAY ORDER 菜单，按 F3(MOVE CURSOR) 将 光标移到所要插入项目的地方，按空格键插入。 4) 建立一个分析组合： 从主菜单中选择 CONFIGURATION 进入 PANEL 菜单，输入一个新的分析组合名，最多 7 个字母，选择该组合的分析项目 2~8 个，选择 F4（ADD PANEL） 储存新的组合。 3、 试剂装载 将已经定过标的测定试剂盒放在仪器试剂栏中。 4、 校准 试剂为批特异性，更换试剂批号或质控失控时需重新定标。 1)从主菜单进入 ORDERLIST 菜单选择 F4（CAL），选择要定标的分析项目，输入样品栏 的位置，输入标准品的批号和效期。 2）选择定标类型：Index Cal、Master Cal 或 Standard Cal 定标。 3）垂直滴加标准品到样品杯中置于相对应的样品栏中，按 RUN，仪器自动进行定标并 储存标准曲线。 5、标本装载及测定 1) 工作单输入 从主菜单进入 ORDERLIST 菜单选择 F6(PATIENT)，输入样品栏的位置编号，输入样品编 号，选择测试项目，确认申请

2公标本测定 根据实验要求选择相对应体积的样品置于相对应的样品杯中，确认样本架上所有标本 的位置一编号是否相符、量是否足够。有无影响吸样的纤维蛋白，有无影响吸样针液面感应 的气泡，项目输入是否正确等，将装有样品杯的样品架放入样品栏中，按N仪器自动进行 测定。 在运行过程中，在or4 er status菜单下可直看当前工作状老。 6、结果查淘 1)从主菜单选择距STS查看当时结果。 2)从主菜单进入ST0 ED RESULTS菜单，速释VIE STORED RESULTS选择所需浏览的 结果。 3)不良结果处理 在Exception菜单下，这定某测试项目，点击Details可帮助查找相关资料。挂 除问圈后，可选择Reun,将样本重新放回样本架，进行重做。 T、结果报告（软件滴示） 所有结果在发出报告前，需结合临味及有关检查结果建一分析，必要时应与临味联系。 四、质控 1,从主菜单进入0闲E风IST菜单，选择F5(COT吃)，选释分析项目，输入样品栏 的位置，选择要分析的质控品的水平，确认申请。 2、垂直满加质控品到相应样品杯中置于相对应的样品栏中。 3、按W,仪器自动进行质控测定并储存结果，同时自动绘制L-J质控由线， 五、影响因素 4、标本：标本严重霜浊或溶血、污染或纤维丝等，均会影响检测结果，严重者可导政 仅器故障，因此，要求标本应新鲜。需充分离心分离血清。 5、试剂盒质量：包括抗体的效价、特异性、亲和力等：试剂金必须在有效期内。 6、校准：必须定期、每更换一个批号试剂均需校清，以免标准曲线漂移迹成结果系统 误差。 7,质控：每天均需进行室内质控以保证结果准确可靠

2) 标本测定 根据实验要求选择相对应体积的样品置于相对应的样品杯中, 确认样本架上所有标本 的位置－编号是否相符、量是否足够，有无影响吸样的纤维蛋白，有无影响吸样针液面感应 的气泡、项目输入是否正确等，将装有样品杯的样品架放入样品栏中，按 RUN 仪器自动进行 测定。 在运行过程中，在 order status 菜单下可查看当前工作状态。 6、结果查询 1）从主菜单选择 RESULTS 查看当时结果。 2）从主菜单进入 STORED RESULTS 菜单，选择 VIEW STORED RESULTS 选择所需浏览的 结果。 3）不良结果处理 在 Exception 菜单下，选定某测试项目,点击 Details 可帮助查找相关资料。排 除问题后，可选择 Rerun，将样本重新放回样本架，进行重做。 7、结果报告（软件演示） 所有结果在发出报告前，需结合临床及有关检查结果逐一分析，必要时应与临床联系。 四、质控 1、 从主菜单进入 ORDERLIST 菜单，选择 F5（CONTROL），选择分析项目，输入样品栏 的位置，选择要分析的质控品的水平，确认申请。 2、 垂直滴加质控品到相应样品杯中置于相对应的样品栏中。 3、 按 RUN，仪器自动进行质控测定并储存结果，同时自动绘制 L-J 质控曲线。 五、影响因素 4、 标本：标本严重脂浊或溶血、污染或纤维丝等，均会影响检测结果，严重者可导致 仪器故障，因此，要求标本应新鲜，需充分离心分离血清。 5、 试剂盒质量：包括抗体的效价、特异性、亲和力等；试剂盒必须在有效期内。 6、 校准：必须定期、每更换一个批号试剂均需校准，以免标准曲线漂移造成结果系统 误差。 7、 质控：每天均需进行室内质控以保证结果准确可靠

六、阵床意义 1》自学 2》荧光偏拟免度分析被广泛应用于药物浓度的检测，具有快速、准确、特异、方便可 自动化，重复性好等特点。 七、仪器保养、常见故障及排除 1、常规保养 从MAINTENANC3菜单，进入PRIME AND FLUSH进行管路冲洗： 2、每日保养： 1》探针内部清洗： a》从主菜单选择AINTENANCE,选择PROBE CLEAN, b)按系统提示在L0 D STAT1GN位置放置2个反应杯， c》在反应预稀释孔和缓冲凌孔各如入1l探针清洗凌。 d山选择0球， 粉添加W反应杯，添加Matrix Cel1纤维杯，更新缓冲液Solution4,更新底物P 及清洗液Solut10m3,清空固体和液体废物。更新库存。 3、每周保养 1)探针外部清洗 a》从主果单进入MAINTENANCE装单，选择PRME AND FLUSH,选择F6(RAI5 E PROSE). b》用棍试子框取95%的酒精清洁探针外部。 c》用柔软的绵低清洁探针外部。 d选择FB(WE0SES》. 2)冲洗站清洗：在INTENANCE菜单下，选择RIME AND FLUSH,达择F6像4 ISE PROSE). 取下冲洗站，用水冲洗干净并重新装上。选择F6 HOME PROSES). 3》注液器清洗：移去纤推杯容器，打开运行中心项盖，取下注液器用程棉棒清洗喷口， 装回注液器，盖上运行中心现盖，装回纤雄杯容墨。 )清洁过滤网：移去纤维杯容器，打开运行中心顾盖，取出过滤网用水冲洗。 5)进行FPIA和IA的光路检查. 4、常见故障及并除

六、临床意义 1) 自学； 2) 荧光偏振免疫分析被广泛应用于药物浓度的检测,具有快速、准确、特异、方便可 自动化，重复性好等特点。 七、仪器保养、常见故障及排除 1、常规保养 从 MAINTENANCE 菜单,进入 PRIME AND FLUSH 进行管路冲洗。 2、每日保养： 1) 探针内部清洗： a) 从主菜单选择 MAINTENANCE，选择 PROBE CLEAN。 b) 按系统提示在 LOAD STATION 位置放置 2 个反应杯。 c) 在反应预稀释孔和缓冲液孔各加入 1ml 探针清洗液。 d) 选择 OK。 2) 添加 RV 反应杯、添加 Matrix Cell 纤维杯、更新缓冲液 Solution4、更新底物 MUP 及清洗液 Solution3,清空固体和液体废物，更新库存。 3、每周保养： 1) 探针外部清洗： a) 从主菜单进入 MAINTENANCE 菜单，选择 PRME AND FLUSH，选择 F6（RAISE PROSE）。 b) 用棉拭子蘸取 95%的酒精清洁探针外部。 c) 用柔软的绵纸清洁探针外部。 d) 选择 F6（HOME PROSES）。 2) 冲洗站清洗：在 MAINTENANCE 菜单下，选择 PRIME AND FLUSH，选择 F6(RAISE PROSE)。 取下冲洗站，用水冲洗干净并重新装上。选择 F6(HOME PROSES)。 3) 注液器清洗：移去纤维杯容器，打开运行中心顶盖，取下注液器用湿棉棒清洗喷口， 装回注液器，盖上运行中心顶盖，装回纤维杯容器。 4) 清洁过滤网：移去纤维杯容器，打开运行中心顶盖，取出过滤网用水冲洗。 5) 进行 FPIA 和 MEIA 的光路检查。 4、常见故障及排除：

A邵TT AxSy■重自动免狡分析仪经常会出现纤维杯卡杯等。若出现卡杯，需等已有样 本检测完毕，仪器选入sop或ady状态，方可根据情误代码参黑仪器说明书推除放障后， 再重白仪器. 见习思考愿 1. 试叙时间分旗荧光免疫分析的基本原理？ 2. 试叙荧光偏振免疫分析的基本原理及操作流程？ (张文辉陶志华)

ABBOTT AxSym 型自动免疫分析仪经常会出现纤维杯卡杯等。若出现卡杯，需等已有样 本检测完毕，仪器进入 stop 或 ready 状态，方可根据错误代码参照仪器说明书排除故障后， 再重启仪器。 见习思考题 1． 试叙时间分辨荧光免疫分析的基本原理？ 2． 试叙荧光偏振免疫分析的基本原理及操作流程？ （张文辉 陶志华 ）