温州医学院文本补体参与的反应及补体测定_临床免疫学检验第十七章.doc_大学文库

第一节补体参与的反型一、免疫溶血试验免度溶血试验的原理是补体能使己被抗体致敏了的红细散发生溶直。实验时将三者混合，置37℃ 30min,条件适合溶血即可发生。《一)参与免疫溶血反应的试利 1、补体不同哺乳动物血清中补体含量高低不等，以服鼠血清中补体含量最为丰富，故实验室多采用新鲜混合豚鼠血清作为补体的来源。补体在体外极易失活，因此采血后需及时分离血清，及时使用，最好在当天用完，必领保存时需小量分装。置一20℃可保存数月（避免反复冻融），如为冻干制品可保存数年，但其活性都会有所降(。使用前需滴定其效价。 2、绵羊红细胞在免疫溶血反应中所用的抗原为绵单红细散(SEC)。可用A15er液《主要成分为陶障酸的、构修假和葡萄糖)保存于4℃三周。用前以生理盐水洗条三次，配成能试险中所用的2乳的悬液。配制好后在42液长比泡，读取吸光度，按该吸光度值调节每次试验所用的红细胞浓度。使之保持一致。 3、溶血着即抗绵羊红细胞抗体，多数是免抗锦羊红细胞血清。一般设有必要用纯化抗体，试验前需经56℃30ain灭活补体。由于免疫溶直试验的结果与所用溶血素的多少有关，因此在试验前必需用免疫溶血试验滴定溶血素效价。该试验技术要点如下： (1)稀释缓冲盐溶液磷酸缓冲盐溶液或巴比晏缓冲盐溶液均可用于免疫溶血试验，叶值的意围在 7.27.4之间，适量的氯化销使溶液达到等渗。为保证补体的活化，在缓冲盐溶液中还需如入适量的钙离子和镁离子。 (2)溶血素的解释溶血素的效价一般都比较高，因此稀释时需注意稀释停数，防止单位跨度太大，不利于效价的确定。可采用交叉等倍稀释法，即两三个等倍稀释系列交叉进行。 (3)溶血素的效价滴定将不问稀释度的溶血素和等量的补体及绵羊红细围混合于试管中，3？℃水浴30后观察。完全溶直的试管中液体红色透明，离心后无细胞沉降。完全不溶血的试管中液体浑渔：离心后红细胞完全沉降，上清液无色透明。不完全溶血的情况介子二者之间。按以上标准。以产生完全溶血的溶血素的最高稀释度作为溶血素的效价，确定为一个单位(nt), 在试验中一般采用2个单位的溶血素。知溶血素的效价为1：3000，配制2个单位的溶血素需将溶血素作 1:1500稀释 (二)免夜溶血试险的川途 2

2 第一节补体参与的反应一、免疫溶血试验免疫溶血试验的原理是补体能使已被抗体致敏了的红细胞发生溶血。实验时将三者混合，置 37℃ 30min，如条件适合溶血即可发生。（一）参与免疫溶血反应的试剂 1、补体不同哺乳动物血清中补体含量高低不等，以豚鼠血清中补体含量最为丰富，故实验室多采用新鲜混合豚鼠血清作为补体的来源。补体在体外极易失活，因此采血后需及时分离血清，及时使用，最好在当天用完，必须保存时需小量分装，置－20℃可保存数月（避免反复冻融），如为冻干制品可保存数年，但其活性都会有所降低，使用前需滴定其效价。 2、绵羊红细胞在免疫溶血反应中所用的抗原为绵羊红细胞（SRBC）。可用 Alsever 液（主要成分为枸橼酸钠、枸橼酸和葡萄糖）保存于 4℃三周。用前以生理盐水洗涤三次，配成试验中所用的 2%~5%的悬液。配制好后在 542nm 波长比浊，读取吸光度，按该吸光度值调节每次试验所用的红细胞浓度，使之保持一致。 3、溶血素即抗绵羊红细胞抗体，多数是兔抗绵羊红细胞血清。一般没有必要用纯化抗体，试验前需经 56℃30min 灭活补体。由于免疫溶血试验的结果与所用溶血素的多少有关，因此在试验前必需用免疫溶血试验滴定溶血素效价。该试验技术要点如下：（1）稀释缓冲盐溶液磷酸缓冲盐溶液或巴比妥缓冲盐溶液均可用于免疫溶血试验，pH 值的范围在 7.2~7.4 之间，适量的氯化钠使溶液达到等渗。为保证补体的活化，在缓冲盐溶液中还需加入适量的钙离子和镁离子。（2）溶血素的稀释溶血素的效价一般都比较高，因此稀释时需注意稀释倍数，防止单位跨度太大，不利于效价的确定。可采用交叉等倍稀释法，即两三个等倍稀释系列交叉进行。（3）溶血素的效价滴定将不同稀释度的溶血素和等量的补体及绵羊红细胞混合于试管中，37℃水浴 30min 后观察。完全溶血的试管中液体红色透明，离心后无细胞沉降。完全不溶血的试管中液体浑浊，离心后红细胞完全沉降，上清液无色透明。不完全溶血的情况介于二者之间。按以上标准，以产生完全溶血的溶血素的最高稀释度作为溶血素的效价，确定为一个单位（unit）。在试验中一般采用２个单位的溶血素，如溶血素的效价为 1：3000，配制２个单位的溶血素需将溶血素作 1：1500 稀释。（二）免疫溶血试验的用途

在免疫溶血试验中所参与的成分有补体，抗原(SBC)及抗体（溶血煮），这三种成分中如有两种是己知的就可测知第三个成分，稀释该成分可测定其效价或含量，如溶血素的滴定是用己知S球C和补体清定溶血素效价：溶血空斑试检是用已知SC和补体检测S蹈C免疫小鼠牌细胞分泌到细胞外的抗SBC抗体，CH。试验是用己知S图和溶血素检测血清总补体溶血活性，补体结合试验是以溶血试验作指示，即用已知SE℃和溶血素检测补体是否被消耗，从而判定抗原抗体的对应情况。抗补体试验也是以溶血试验作指示，检测血清中有无能结合补体的免疫复合物。二、补体结合试验 (一)原理补体结合试验(cpl0 nt fixation test,CFT)是利用抗原抗体复合物可结合补体，而游离的抗原或抗体不能结合补体的特点，以溶直素和绵羊红细胞这一对抗原抗体系统作为指示系统，用已知抗原（或抗体)检测未知抗体（或抗原的试验。在试险中有三个系饶参与反应：①指示系饶，即溶血素及绵羊红细胞。试验时常将其模先结合，形成致银绵羊红细胞(sensitized sheep RBC,SS求BC:②补体：③反应系统，即已知的抗原（抗体）和待测的抗体（抗原）。团1了-1补体结合试验原理示意图如图17-1。在反应系饶中，如只有己知的抗体（或抗旱），待测标本中没有相应的抗原（咸抗体），补体不能被结合，仍处于游离的状态，可与后加入的致敏红细照发生结合，列起溶血，为补体结合试验阴性。如在反应系统中存在待测的抗原（或抗体），则能与已知的相对应的抗体（或抗原）形成抗原抗体复合物，该复合物能结合补体，当加入指示系统时，因反应系统中无瓣离补体存在，不能溶血，为补体结合试验阳性。 (二)技术要点补体结合试险中各成分之间量经须有适当的比例，才能避免结果的假阳性或假阴性，因此，除SC 浓度因定在1车汽外。其他成分如溶血素，补体，抗原及抗体等均雷事先滴定其单位，配制成特定的浓度，以保证结果的可靠性。在补体结合试验中，待检血清使用前应预先灭活补体。试验用2如溶血素。、抗原和抗体的滴定抗原抗体反应在比例适当时出现的反应结果最为明显，因此在试验前需对抗解抗体进行棋盘滴定，找出最适比。在抗源抗体棋盘滴定中，使用溶血系统作为指示系统，以10不溶血作为反应终点，选择抗原和抗体都星强阳性反应的最高稀释度作为抗原和抗体的效价(1个单位)

3 在免疫溶血试验中所参与的成分有补体，抗原（SRBC）及抗体（溶血素），这三种成分中如有两种是已知的就可测知第三个成分，稀释该成分可测定其效价或含量。如溶血素的滴定是用已知 SRBC 和补体滴定溶血素效价；溶血空斑试验是用已知 SRBC 和补体检测 SRBC 免疫小鼠脾细胞分泌到细胞外的抗 SRBC 抗体；CH50 试验是用已知 SRBC 和溶血素检测血清总补体溶血活性。补体结合试验是以溶血试验作指示，即用已知 SRBC 和溶血素检测补体是否被消耗，从而判定抗原抗体的对应情况。抗补体试验也是以溶血试验作指示，检测血清中有无能结合补体的免疫复合物。二、补体结合试验（一）原理补体结合试验（complement fixation test, CFT）是利用抗原抗体复合物可结合补体，而游离的抗原或抗体不能结合补体的特点，以溶血素和绵羊红细胞这一对抗原抗体系统作为指示系统，用已知抗原（或抗体）检测未知抗体（或抗原）的试验。在试验中有三个系统参与反应：①指示系统，即溶血素及绵羊红细胞，试验时常将其预先结合，形成致敏绵羊红细胞（sensitized sheep RBC，SSRBC）；②补体；③反应系统，即已知的抗原（抗体）和待测的抗体（抗原）。如图 17-1，在反应系统中，如只有已知的抗体（或抗原），待测标本中没有相应的抗原（或抗体），补体不能被结合，仍处于游离的状态，可与后加入的致敏红细胞发生结合，引起溶血，为补体结合试验阴性。如在反应系统中存在待测的抗原（或抗体），则能与已知的相对应的抗体（或抗原）形成抗原抗体复合物，该复合物能结合补体，当加入指示系统时，因反应系统中无游离补体存在，不能溶血，为补体结合试验阳性。（二）技术要点补体结合试验中各成分之间量必须有适当的比例，才能避免结果的假阳性或假阴性。因此，除 SRBC 浓度固定在 1%~2%外，其他成分如溶血素，补体，抗原及抗体等均需事先滴定其单位，配制成特定的浓度，以保证结果的可靠性。在补体结合试验中，待检血清使用前应预先灭活补体。试验用 2u 溶血素。 1、抗原和抗体的滴定抗原抗体反应在比例适当时出现的反应结果最为明显，因此在试验前需对抗原抗体进行棋盘滴定，找出最适比。在抗原抗体棋盘滴定中，使用溶血系统作为指示系统，以 100%不溶血作为反应终点，选择抗原和抗体都呈强阳性反应的最高稀释度作为抗原和抗体的效价（1 个单位）。图１7-1 补体结合试验原理示意图

如表17-2所示结果，1130的补体0.12l为1u,2则为1130补体0.24a1。正式试验中采用2u的补体，补体用量为0.2，雷对补体的稀释倍数进行计算，30：X=0.24:0.2。x-25,则将补体原液作1： 25稀释后，每021即含有2u的补体，在人血清中可能存在少量的循环免疫复合物，这些免疫复合物如是由g心、1M类等抗体形成，就可与补体发生结合，消耗补体，从而引起试险结果的偏差。因此在补体的滴定过程中，需加入抗解或抗体成分以消除影响。 3、正式试验将已滴定好的补体，已知抗原《或抗体)等按试验要求配成一定浓度，与缓冲盐溶液及待检样品依次加入试管中，同时设置一系列对照。37℃水落60n或4℃16~1h后，再加入配好的政敏红细鞋，置37℃水浴30加in。温有完成后观察结果，表17-3补体结合试验管号特检样品抗原(1) 补体(1) 缓冲盐溶致敏红细 a1) 液(al) 胞(a1) 待测管 0.1 01 0.2 37℃ 02 37℃ 待测血清对盟 0.1 02 0,1 水溶 0.2 水溜抗原对照一 01 0.2 0.1 60ain a.2 30min 补体对里(2u) 0.1 02 0.1 或 a.2 补体对题(1山) 一 0.1 0.1 0.2 4C 02 补体对属(0.5而) 0.1 0.05 0.25 16-18 02 改敏红细胞对理 0.4 0.2 先覆黎对思管结果是否正确。待检血清对盟管和抗原对照管，应完全溶血：补体对照管中2如补体管应完全溶血，1和补体管全溶或部分不溶，Q,知补体管应不溶。如果Q.u补体对丽出现全溶说明补体量过多，如补体对靨不出现全溶说明补体量不足，均应重复试验。致敏红细园对属，应完全不溶血。在对照管结果全部正确的前提下观察特测管的结果，如出现完全不溶血则为补体结合试验图性，说明样品中存在相应的抗体〔或抗原)。还可以对特测样品进行稀释，以出现100%不溶血的血清最高稀释度为血清中抗体《或抗原)的效价， (三)方法评价补体结合试验是一种传统的免疫学技术。该试验本身具有不少优点，如灵敏度较高，特异性较强，可检测多种类型的抗体或抗原，并可测定其效价，试险不需特殊仪器，易于在基层单位普及等。利用补体结合试验。可进行传染病的诊新。流行病学的调查以及某些自身抗体的检测，但补体结合试验参与反应的成

5 如表 17-2 所示结果，1：30 的补体 0.12ml 为 1u，2u 则为 1：30 补体 0.24ml。正式试验中采用 2ｕ的补体，补体用量为 0.2ml，需对补体的稀释倍数进行计算，30 ：X=0.24 ：0.2，X=25，则将补体原液作 1： 25 稀释后，每 0.2ml 即含有 2u 的补体。在人血清中可能存在少量的循环免疫复合物，这些免疫复合物如是由 IgG、IgM 类等抗体形成，就可与补体发生结合，消耗补体，从而引起试验结果的偏差。因此在补体的滴定过程中，需加入抗原或抗体成分以消除影响。 3、正式试验将已滴定好的补体，已知抗原（或抗体）等按试验要求配成一定浓度，与缓冲盐溶液及待检样品依次加入试管中，同时设置一系列对照。37℃水浴 60min 或 4℃16～18h 后，再加入配好的致敏红细胞，置 37℃水浴 30min。温育完成后观察结果。表 17-3 补体结合试验管号待检样品 (ml) 抗原（ml）补体（ml）缓冲盐溶液（ml）致敏红细胞(ml) 待测管 0.1 0.1 0.2 — 37℃ 0.2 37℃ 待测血清对照 0.1 — 0.2 0.1 水浴 0.2 水浴抗原对照 — 0.1 0.2 0.1 60min 0.2 30min 补体对照（2u） — 0.1 0.2 0.1 或 0.2 补体对照（1u） — 0.1 0.1 0.2 4℃ 0.2 补体对照（0.5u） — 0.1 0.05 0.25 16-18h 0.2 致敏红细胞对照 — — — 0.4 0.2 先观察对照管结果是否正确。待检血清对照管和抗原对照管，应完全溶血；补体对照管中 2u 补体管应完全溶血，1u 补体管全溶或部分不溶，0.5u 补体管应不溶。如果 0.5u 补体对照出现全溶说明补体量过多，2u 补体对照不出现全溶说明补体量不足，均应重复试验。致敏红细胞对照，应完全不溶血。在对照管结果全部正确的前提下观察待测管的结果，如出现完全不溶血则为补体结合试验阳性，说明样品中存在相应的抗体（或抗原）。还可以对待测样品进行稀释，以出现 100%不溶血的血清最高稀释度为血清中抗体（或抗原）的效价。（三）方法评价补体结合试验是一种传统的免疫学技术。该试验本身具有不少优点，如灵敏度较高，特异性较强，可检测多种类型的抗体或抗原，并可测定其效价，试验不需特殊仪器，易于在基层单位普及等。利用补体结合试验，可进行传染病的诊断，流行病学的调查以及某些自身抗体的检测，但补体结合试验参与反应的成

分较多，影响因素复杂，操作手续繁项且要求严格，容易发生失误导政错误结果的出观。因此，现在多已鼓其他更为简便敏感的方法所取代。三、补体候赖的细胞毒试验补体依线的细胞毒(cc即lement dependent cytotoxicity,CDC)试验的原理是：带有特异抗原的彩细胞与相应抗体结合后，在补体参与下，把细胞糢被损伤，配细胞死亡，染料进入细胞而着色，配细胞被杀伤的情况多用形态学方法进行检测。利用C试验可以检查机A抗原，也可用于检测鉴定讯A的细胞毒抗体。在试验中抗原彩细数为人淋巴细胞。抗体为针对相应围A抗原的抗血清，补体为新鲜兔血清，有资料表明，在①C试验中使用兔补体效果好于其他动物补体。 CC试验的方法详见A检测（第三十三章）。四、免皮粘附试验抗原抗体复合物激活补体后，可通过C或。粘用在具有补体受体C的红细酸、血小板或某些淋巴细围上，形成较大的豪合物，利用这一原理设计的免疫粘附试验(1 ne adherence test),可用于检测抗原域抗体，也可检测闻胞上的C家1，人红细围上具有C,受体，可采用人红细围作为指示细围进行免疫粘附试验。当抗原抗体相树应藏活补体后，抗星-抗体-补体复合物粘附于红细胞上，可使红细围发生凝集，该试验可检测可溶性暖颗粒性抗原，也可检测免疫复合物：如以醇母多糖潘活补体，酵母细胞会粘附于红细散上形成花环，此方法可检测红细胞上的补体受体。还可用Raji细胞进行免疫粘附试验，aji细胞是由Burkitt淋巴瘤患者分离建株的B细胞系。Raji 细围表面有大量的C,C,C受体，能和己与补体结合的免疫复合物结合。做此用间接免疫黄光法或放射免疫法可检测待检血清中的循环免疫复合物· 第二节、补体的测定一、补体活性的测定 (一)血清总补体溶血活性(co即lement hemolysis5O,l)的测定 1,试验原理根据免疫溶血试验原理设计。当红细幽与溶直素的量一定时，在规定的反应时间内。溶血程度与补体的量及活性正相关，们不是一个直线关系。以溶血百分率为飒坐标，相应的补体含量为情坐标绘图可得到典型的“S”彩曲线

6 分较多，影响因素复杂，操作手续繁琐且要求严格，容易发生失误导致错误结果的出现。因此，现在多已被其他更为简便敏感的方法所取代。三、补体依赖的细胞毒试验补体依赖的细胞毒（complement dependent cytotoxicity, CDC）试验的原理是：带有特异抗原的靶细胞与相应抗体结合后，在补体参与下，靶细胞膜被损伤，靶细胞死亡，染料进入细胞而着色。靶细胞被杀伤的情况多用形态学方法进行检测。利用 CDC 试验可以检查 HLA 抗原，也可用于检测鉴定 HLA 的细胞毒抗体。在试验中抗原靶细胞为人淋巴细胞，抗体为针对相应 HLA 抗原的抗血清，补体为新鲜兔血清，有资料表明，在 CDC 试验中使用兔补体效果好于其他动物补体。 CDC 试验的方法详见 HLA 检测（第三十三章）。四、免疫粘附试验抗原抗体复合物激活补体后，可通过 C3b 或 C4b 粘附在具有补体受体 CR1 的红细胞、血小板或某些淋巴细胞上，形成较大的聚合物。利用这一原理设计的免疫粘附试验（immune adherence test），可用于检测抗原或抗体，也可检测细胞上的 CR1。人红细胞上具有 C3b 受体，可采用人红细胞作为指示细胞进行免疫粘附试验。当抗原抗体相对应激活补体后，抗原-抗体-补体复合物粘附于红细胞上，可使红细胞发生凝集，该试验可检测可溶性或颗粒性抗原，也可检测免疫复合物；如以酵母多糖激活补体，酵母细胞会粘附于红细胞上形成花环，此方法可检测红细胞上的补体受体。还可用Ｒaji 细胞进行免疫粘附试验。Raji 细胞是由 Burkitt 淋巴瘤患者分离建株的Ｂ细胞系。Ｒaji 细胞表面有大量的Ｃ1q,C3b,C3d 受体，能和已与补体结合的免疫复合物结合。借此用间接免疫荧光法或放射免疫法可检测待检血清中的循环免疫复合物。第二节、补体的测定一、补体活性的测定（一）血清总补体溶血活性（complement hemolysis 50%，CH50）的测定 1、试验原理根据免疫溶血试验原理设计。当红细胞与溶血素的量一定时，在规定的反应时间内，溶血程度与补体的量及活性正相关，但不是一个直线关系。以溶血百分率为纵坐标，相应的补体含量为横坐标绘图可得到典型的“S”形曲线

7 从图 17-1 可见，在 50%溶血附近，“S”形曲线最陡，接近一条直线。在此范围内补体活性稍有变动，溶血程度就有明显变化，即是以 50%溶血作为反应的终点比以 100%溶血作为终点更为敏感，因而该试验被称为补体 50%溶血试验，即 CH50 试验。以引起 50%溶血所需的最小补体量为一个 CH50 单位，由此可以计算出待测血清中总的补体溶血活性，以 CH50 KU/L 表示。 2、试验方法用于检测补体活性的血清必须新鲜。按表 17-4 在各试管中加入反应物，置 37℃水浴 30min。同时配制 50%溶血标准管，取 2%SRBC 悬液 0.5ml，加 2.0ml 蒸馏水，使 SRBC 全部溶解，再加入 2.0ml 1.8% Nacl 溶液校正为等渗溶液，最后加 2%SRBC 悬液 0.5ml，即成为 50%溶血标准管。表 17-4 血清总补体溶血活性的测定管号 1：20 稀释的待检血清（ml）缓冲液（ml） 2u 溶血素 2%SRBC（ml） 1 0.15 1.35 0. 5 0. 5 2 0.20 1.30 0.5 0.5 3 0.25 1.25 0.5 0.5 4 0.30 1.20 0.5 0.5 5 0.35 1.15 0.5 0.5 6 — 1.50 0.5 0.5 将温育好的试管离心，通过观察比较，选择溶血程度最接近 50%溶血的两管，在分光光度计上 542nm 读取吸光度，以最接近 50%溶血标准管吸光度的一管为终点管。以该管的血清用量按以下公式计算 CH50 值。１血清总补体溶血活性（CH50KU/L）＝× 稀释倍数血清用量为更精确的测定补体 CH50 单位，可设 100%溶血管，反应完成后，542nm 比色，以各管的吸光度计算各管的溶血度 Y，Y=试验管 A 值/100%溶血管 A 值，再计算 Y/（1-Y）。在对数纸上，以各管血清用量为纵轴， Y/（1-Y）为横轴作图，可得一条直线，如图 17-3。当溶血度为 50%时，Y/（1-Y）为 1.0，以此时纵轴上的血清用量按以上公式计算待检血清 CH50 单位。本例中，Y/（1-Y）为 1.0 时，血清用量为 0.5ml，则待测血清 CH50 为 100KU/L。图１7-2 溶血程度与补体含量的关系图 17-3 血清 CH50 的测定

8 用 CH50 法测定血清总补体活性时，所测得的值与反应体积有关系，反应体积大，测得的值小。在表 17-4 的方法中，反应总体积为 2.5ml，所测得的血清总补体活性的参考范围为 50～100KU/L。 CH50试验检测的是血清中补体经典活化途径的溶血活性，其结果与补体C1~C9各组分的量及活性均有关。（二）旁路途径溶血活性（alternative complement pathway 50%，APH50）测定１.测定原理：正常情况下，涎酸可抑制 B 因子活性。家兔红细胞所含涎酸量低于其他动物的红细胞，可以激活血清中的 B 因子，引起旁路途径活化，导致兔红细胞溶解。在红细胞量一定时，在规定反应条件下，溶血程度与血清中参与旁路活化的补体量及活性呈正相关。与 CH50 测定相似，以引起 50%溶血所需的最小补体量为一个 APH50 单位，可计算出待检血清中补体旁路途径溶血活性，以 APH50 KU/L 表示。２.测定方法：补体活化时，经典途径需有钙离子及镁离子参与，旁路途径只需镁离子参与。用 EGTA （二乙醇双醚四乙酸）可以螯合钙离子，抑制补体经典途径而不影响旁路途径的活化。测定中所用的缓冲盐溶液含有 EGTA。兔红细胞用枸橼酸盐抗凝，缓冲盐溶液洗涤三次后，配制成 0.5%浓度。将待测血清用缓冲盐溶液作 1：4 稀释后，与其他试剂按表 17-5 依次加入试管中，混匀，置 37℃水浴 30min。同时配制 50%溶血标准管。表 17-5 补体 APH50 测定管号 1：4 稀释的待测血清（ml）缓冲液（ml） 0.5%兔红细胞（ml） 1 0.10 0.5 0.4 2 0.15 0.45 0.4 3 0.20 0.40 0.4 4 0.25 0.35 0.4 5 0.30 0.30 0.4 6 — 0.6 0.4 温育完成后，取出试管离心后，与 50%溶血标准管比较，再用分光光度计确定与 50%溶血最接近的一管为终点管。以该管的血清用量计算血清 APH50 的测定值：１血清补体 APH50（KU/L）＝ × 稀释倍数血清用量用以上方法测得的血清 APH50 的正常参考值为 21.7±2.7KU/L

本试验反联的是补体旁路途径的溶血活性，其结果与C,B因子，P因子，D因子及C,C,各组分的含量及活性均有关系， (三)C,活性测定用氢水处理愿服血清后可除去其中的G,由于补体不整依次激活。因此。这种缺少G的血清(R)不能使溶血素致敏的绵羊红细旅溶血。当加入含有G的特检血清后。补体连镜反应恢复，发生溶血，溶血程度与待检血清中的C活性相关，测定以50%溶血作为反应终点。缺乏C的抗原抗体补体复合物(ER)的制备，在19份新鲜混合豚鼠血清中加入1份1算的氢水，混匀后，置37℃水浴30mn,用10l/L的盐酸调H至7.2。即可得到缺乏C的血清（昆），答用。取5算羊红细胞悬液与等量如溶血素混匀，置37℃水浴30▣in,即得政敏红细胞(EA).将EAdol与0.25al混匀，室温收置1ain即为ER,需现用现配。将待检血清用缓冲盐溶液作1：150稀释后。与其他试剂一起，按表176依次加入试管中，混匀后，置37℃水浴30▣in,同时配制50%溶血标准管. 表176G溶血活性测定管号 1:150传检直请缓冲液(ul) EAR (ul) 溶血单位率 (u1) (/L) 1 965 100 30000 2 10 90 100 15000 3 20 80 100 7500 4 30 70 100 4950 40 60 100 3750 100 100 ◆该管为50序溶血终点时的C溶血单位盟育结来后。在各管及50%溶血标准管中各加入缓冲液2.5al,混匀后离心，在分光光度计上52m 比色，以最接近50八溶直的测定管为终点管，计算C,溶血活性公式同Q。测定，正常人血清C溶血性正常范围为8270士20g7阳/1.， (四)B因子溶血活性测定 B因子在补体旁路逸径中是一种重要组分，如肤乏B因子将不能使补体旁路活化。将新鲜正常人混合血清56℃水落15ai即可除去其中的B因子，成为缺乏B因子的血清（阳），将翘加入兔红细散，不会引起兔红细胞溶血。如如入含有B因子的待检血清，其中的B因子可被兔红细胞激活面使补体旁路途径重新活化而使兔红细型溶血。溶血程度与特检血清中的B因子溶血活性相关

9 本试验反映的是补体旁路途径的溶血活性，其结果与 C3，B 因子，P 因子，D 因子及 C5~C9 各组分的含量及活性均有关系。（三）C4 活性测定用氨水处理豚鼠血清后可除去其中的 C4，由于补体不能依次激活，因此，这种缺少 C4 的血清（R4）不能使溶血素致敏的绵羊红细胞溶血。当加入含有 C4 的待检血清后，补体连锁反应恢复，发生溶血，溶血程度与待检血清中的 C4 活性相关，测定以 50%溶血作为反应终点。缺乏 C4 的抗原抗体补体复合物（EAR4）的制备：在 19 份新鲜混合豚鼠血清中加入 1 份 14%的氨水，混匀后，置 37℃水浴 30min，用 1mol/L 的盐酸调 pH 至 7.2，即可得到缺乏 C4 的血清（R4），备用。取 5%羊红细胞悬液与等量 4u 溶血素混匀，置 37℃水浴 30min，即得致敏红细胞（EA）。将 EA4ml 与 R40.25ml 混匀，室温放置 15min 即为 EAR4。需现用现配。将待检血清用缓冲盐溶液作 1：150 稀释后，与其他试剂一起，按表 17-6 依次加入试管中，混匀后，置 37℃水浴 30min，同时配制 50%溶血标准管。表 17-6 C4 溶血活性测定管号 1：150 待检血清（ul）缓冲液（ul） EAR4（ul）溶血单位* （KU/L） 1 5 95 100 30 000 2 10 90 100 15 000 3 20 80 100 7 500 4 30 70 100 4 950 5 40 60 100 3 750 6 - 100 100 - *该管为 50%溶血终点时的 C4 溶血单位温育结束后，在各管及 50%溶血标准管中各加入缓冲液 2.5ml，混匀后离心，在分光光度计上 542nm 比色，以最接近 50%溶血的测定管为终点管，计算 C4 溶血活性公式同 CH50 测定。正常人血清 C4 溶血性正常范围为 8 270±2 087 KU/L。（四）Ｂ因子溶血活性测定 B 因子在补体旁路途径中是一种重要组分，如缺乏 B 因子将不能使补体旁路活化。将新鲜正常人混合血清 56℃水浴 15min 即可除去其中的 B 因子，成为缺乏Ｂ因子的血清（RB），将 RB 加入兔红细胞，不会引起兔红细胞溶血。如加入含有Ｂ因子的待检血清，其中的 B 因子可被兔红细胞激活而使补体旁路途径重新活化而使兔红细胞溶血，溶血程度与待检血清中的 B 因子溶血活性相关

温州医学院 文本 补体参与的反应及补体测定_临床免疫学检验第十七章

温州医学院文本补体参与的反应及补体测定_临床免疫学检验第十七章