上海口胶民学4年12川第13卷前6期 544 Shnghn kumul af Stamatringy Vol.13 No.6 Decemmher 2044 T文章编号11006-7248200406-0544-05 口腔白色念珠菌基因型与扁平苔藓的关系 吴这，周苦问，唐国瑶 (上海第二医科大学容整九然瓷口腔内稀，上海201) 核]日的：分新口腔白色念珠离基因型与口应肩平若酶的关系，白色老珠菌效病因与共生菌蒸因型的相关性，为 修味制定有效脚治捐施烫供：据。方法：采用随机扩增多态生八NA用A形林因分登方法.对斯林口整含殊周行基 因型现察，46株菌分为以下3组，白位康志属者口应中所取的9，共生卤为下组：白口2单纯白色念珠菌盛路者口 应中所取的21株致有西为CC组：口腔桌平若僻件发的16棒致纳南为P里。结果：6候老珠菌中，40林枝鉴定为 白色念珠潮，共因分孕显需不可念家齿有各白担特#因型，0C凯与飞州白色念家倒恭因型相以度较高，1P组白色 念发岗托因到无编中趋势.与N组比较存在是率差异(001》。同是段将陶的白色念然的，组与瓶可林因型包作在 整性差送(P0.01).结论：〔1BD基因分型可将老珠同区分至篇种本平，也可深入分快同购并型“，(2)口腔单 艺白色念妹尚感果可能自共生销商评失诱引起.甲由内源性感染引起。(3)斯平首悲作发白色念荫法因型无案中 趋势提示瑞平行蓝伊发白色念殊离行在外源性感染的可能。〔4》不同口腔菇酶病所律发的白色念深倘恭因型不可。 [伏健可]白色之珠前，感回型：随机扩增多态性DNA [中图分类号17815【文第标识码]A Relatsonship between the gemotype of Candida nlhicans and oral lichen planus WU Lan.ZHO Zeng-lum,TAM; Guo-yoo (Departent ofr Medieine,Nk People's Mopi.School of Somology.Shng Secend Medical icer xily.Slamghai 2i1 Chine) [Abetract]PURPOSE The pnnt u ws alaplod m pede into the rolation betwren th gyp af Candid bicans and oral lichen planus anelze the relot of the gerotypee lay a good foundation for the preventio or candidiasis.METHODS:The p reseat study odepted random mplifind palmorp长DNA (RAPD In an the onl cavity uf 9 health dults (N groupl and the patients mucosal disease (including 16 lichen pleaus.LP group and 21 oral cundidiasis.OC groupl RESULTS: 0 ere identified as Candida albicans.Differem candida species eraerged goup and N group.There ws no distinet similarity in R.APD fagerprantig map of the IP group.which also had signifi. cun differente to de gemtspe of the N group(PcD.001).There wu sgnificant differrnce between OC poup and IP group (PeD.0011].CONCLUSION:(1)The RAPD)pnotype further different types the sume peces.(2 Ocl candidiis may originue frem commensal s Cadidn albicans isolated fiom aral eandidwee enogu Aerordg to the of grotypes.there might be no genetic bomal. between oommenl strains and potbopenin srains in IPpThe penotypes of pathogerie strins were no iderti- ois differen球kin山of otal mucosu disea [Key words]Candi albican;Gemotype:RAPD Shainghai J Stomatol,2004,13(6544-548.http://shkqyx.periodicab.cum.cn 【期日期]4-01-解：[督出日周04--0 「林金项日】上专市高等宁控科分拉术发展基全01丽四 作者可介1美此(19四-)，女，项士，住脱盛生 [通明作者]周管月，Td:位1-1331-25.-1il:d小u安 bgihatnilcon @204年服权日（上，青口腔医学辑多所有
!文章编号"!""#$%&’()&""!*"#$"$!!$"$ !收稿日期" %""!&"’&"(# !修回日期" %""!&")&%* !基金项目" 上海市高等学校科学技术发展基金$"’+",% !作者简介" 吴岚$’*,*&%&女&硕士&住院医生 !通讯作者" 周曾同&-./’"%’&#)’)()!’&$%()&0&123/’45674.89$ :689;56:123/?@ AB@C>D 基因分型方法&对 !# 株口腔念珠菌行基 因型观察* !# 株菌分为以下 ) 组&自健康志愿者口腔中所取的 * 株共生菌为 ? 组#自口腔单纯白色念珠菌感染者口 腔中所取的 %’ 株致病菌为 EF 组#口腔扁平苔藓伴发的 ’# 株致病菌为 GC 组* 结果’!# 株念珠菌中&!" 株被鉴定为 白色念珠菌&基因分型显示不同念珠菌有各自独特基因型* EF 组与 ? 组白色念珠菌基因型相似度较高* GC 组白色 念珠菌基因型无集中趋势H与 ? 组比较存在显著差异$!I" 基因分型可将念珠菌区分至菌种水平&也可深入分辨+同种异型,* $%%口腔单 纯白色念珠菌感染可能由共生菌菌群失调引起&即由内源性感染引起* $)%扁平苔藓伴发白色念珠菌基因型无集中 趋势&提示扁平苔藓伴发白色念珠菌存在外源性感染的可能* $!%不同口腔黏膜病所伴发的白色念珠菌基因型不同* !关键词" 白色念珠菌#基因型#随机扩增多态性 >?@ !中图分类号" B,(’???@@3 A51*& B 67,)%4$3%8 9:;9? -5. PQ.R.8: R:7SO T2R 2::.1P:.S :6 PQ6U. 38:6 :5. Q./2:368 U.:T..8 :5. 9.86:OP. 6V F28S3S2 2/$ U3=28R 28S 6Q2/ /3=5.8 P/287R H 282/O4. :5. Q./2:3W3:O 6V :5. 9.86:OP. U.:T..8 =611.8R2/ R:Q238R 28S P2:569.83= R:Q238RH:6 /2O 2 966S V678S2:368 V6Q :5. PQ.W.8:368 28S :Q.2:1.8: V6Q =28S3S32R3RAB?@ XB@C>Y :6 282/O4. !# F28S3S2 RP.=3.R T53=5 T.Q. 3R6/2:.S VQ61 :5. 6Q2/ =2W3:O 6V * 5.2/:5 2S7/:R A? 9Q67PY 28S :5. P2:3.8:R R7VV.Q389 VQ61 6Q2/ 17=6R2/ S3R.2R. A38=/7S389 ’# /3=5.8 P/287RHGC 9Q67P 28S %’ 6Q2/ =28S3S32R3RH EF 9Q67PY=:DA=? !" R:Q238R T.Q. 3S.8:3V3.S 2R F28S3S2 2/U3=28R<>3VV.Q.8: =28S3S2 RP.=3.R .1.Q9.S T3:5 S3VV.Q.8: 9.8.:3= :OP.R V389.QPQ38:389 12P 6V :5. GC 9Q67PH T53=5 2/R6 52S R3983V3$ =28: S3VV.Q.8=. :6 :5. 9.86:OP. 6V :5. ? 9Q67P$!I" 9.86:OP. 86: 68/O =28 S3R=Q31382:. =28S3S2 RP.=3.RH U7: 2/R6 =28 S3R:38973R5 V7Q:5.Q S3VV.Q.8: :OP.R 38 :5. R21. RP.=3.R =*K(.*K& ! "#$%&#$’()**L+,M-N./OLL0OLP12##3/ 4 4)*QR/ST+"4&’2&3K#)T3’UT3( 上海口腔医学 !""# 年 $! 月 第 !% 卷 第 & 期 .1##. "#$%&#’( ’()*%$+ )* ",(-$,(+(&. /(+01% 2(0& +,-,./,03456#
吴风，享口验白色念珠出品因型与积平的群的关第 ULan.et al.Heaiutohtip betwren the perdtype ef Canla allioants ad onul lichem plus ·545· 白色念珠菌（又称白鱼假酵母南）是口腔正 1月在我院口腔轮膜前专科观诊的36例典者， 常的群的一部分。46%的正常健城无症状个体的口12传株采集及培乔黎定保存 腔都可分离到白色老我茵。当机体免疫功能成防淘 12.1菌株采集及培养共生菌组川含漱浓缩法采 力降低时，或正常寄居衡生物问相互制的作用失调 取菌株，其余2组用棉稳拭子法采取菌株。含激浓笔 时，易引起念珠商病。在口腔含床药病中，除白色念 法：围能康志品者用10ml无丙磷酸盐援冲液充分含 珠菌病外，扇平苔背，白斑等疾瑞与白色念珠菌关 改lmin,收集含澈液，4000min离心5min,报沉淀 系密切。肩平节醇患者白色念珠胸越染率达4际， 的1m均匀涂布于沙仅劳民魂胎平板上，37℃培养 白旺恶变病例5%局部件白色念床南感染日。念味2448h。棉捻拭了法：川生理盐水湿润的无菌棉枪 南越染可在良生上皮谢生基超上引发异常滑生，池 反复涂樱口腔药膜白色多珠两锈染处，再将棉批涂 可在并常增生基础上加间卷变“。扁平苔箭忠者上 布于沙保劳氏琼图平板上，37℃培养24-486。 皮结构改变，对念珠抵抗力低下，另外治疗过程 12.2笛株装定及保存 中使用的药物也可能导致有辟失调，利于念珠有的 (1)南落形态学观黎：待南落出现后，挑取型 增道与入侵判。白色色珠菌的入饺又可加制品膜充 菌落形接种于沙保劳氏琅指平板，反复3次，以达到 血魔烂，因而扇平若醒的治疗过程中抗真两治疗也 分离纯化的目的，问时观张阿落形态。年管形成实 是·个重爱环节冈 验：挑取少量菌株接种于正常人血清中，混匀，盟 随机扩牌多表性DNAP4(Random amplified 37培养3h后涂片观黎。厚壁孢了形成实验：采用 polymorphie DNA,RAPD)是H的最常用的基因分型 出室载片培养法。收1袋吐出米静瑰指培养基，26℃ 方法。它所雷的D小A量少快速简单.分浙力高。口培养4别后镜下观黎。白色念珠陶年管形成实验划 腔白色念珠菌感染除与宿士全身及局部易感因素 性，厚壁孢子形成实验可见程信丝顶端出现厚座孢 有关外，与白色色珠菌本身的基因因素是否相关， 子，而其他菌种只见假菌丝，未见项州厚壁孢子。 一是国内外未能解决的问恩。本文片在额过白色 (2)CHROMa吧ar(Candida暴色培养基培养（法 色珠菌RAPD基因分型对健康者携带的白色念珠 国CHROMagar公司)：将菌株划线棱种于 药共生菌，口腔府平苔辞患者和口腔白色念床药感 CIIB0 Magar Candida显色培养基，30℃培养，48h后 染惠者的白色念珠窗致利首进行研究，对表型难以 观察。白色念珠菌显示绿色。热带念珠菌显不灰蓝 区分的南株作出基因分型.使口胶白色多珠南分类 色，白色为其他癸平会珠南。 鉴定由表型向基因型深化，进面研究分析白色念珠 (3)菌株保存采月液体石蜡覆盖研究菌林于 菌基因与扁平若解的关系.确定式感染来源为内 4℃冰稻保存啡。 性还是外源性，以期从基因分型水平为临床上制定 12.3DNA抽提.含量绅度蔡定保存为种接种于 改时有效的助治莲提供可华依据，并为口皇白色 YD周体培莽基（等母浸青10g、蛋白藤10作.葡荷 多珠恼分子瓷行辆学深入研究莫定莘。 稻20g.琼脂15g,溶于1000l燕馏水)4h活化.可 1材料与方法 接种干YD液体培养基增菌瘠养。采用脖耳聚解隔 (小i,美围GMA公可)南体皲联，传统茶酚氯 1.1所究对 仿混合提取法抽提D八A。采用分光光度计法测定 共分3组.分别是口腔肩平若群组(LP组)：16 DNA的纯度及含量。 例，男4例，女12例：年龄5079岁，平均年龄625 12.4RAPD基因分型根据RAPD基因分型的原 岁。共生菌组N组)：9例，男3例，女6例：年龄47- 则设计1对速机引物.引物1：5”-ACGGTACACT- 77岁.平均年龄60,8划。口胶单纯白色念珠两越染 3”,引物2：5'-TTTCCGCC-3'。反条件是94℃ 组(0C组)：21倒，男7例，女14例：年静25-86岁， 1min交性，36℃1mn退火，72℃2min延传，45个 平均61.9岁 鎘环后72℃延钟10min。反应产物疏糖凝胶电 1.12纳入标准共生菌划菌株（自健康志恩者， 泳应用数码成像系统对电泳凝胶拍州。电冰图谱用 要求近3个月未服用抗生素，无泵统性疾病，无口 德国7i公司的KS4030国版本图像分析系统进 腔黏膜病.其余2组茵林来白2001年8月2003年 行分析。该软针能分析问一张图片中任意2条该道
白色念珠菌!又称白色假丝酵母菌"是口腔正 常菌群的一部分# !"!的正常健康无症状个体的口 腔都可分离到白色念珠菌# 当机体免疫功能或防御 力降低时$或正常寄居微生物间相互制约作用失调 时$易引起念珠菌病# 在口腔念珠菌病中$除白色念 珠菌病外$扁平苔藓%白斑等疾病与白色念珠菌关 系密切#$% # 扁平苔藓患者白色念珠菌感染率达 !&!$ 白斑恶变病例 "’(局部伴白色念珠菌感染#)% # 念珠 菌感染可在良性上皮增生基础上引发异常增生$也 可在异常增生基础上加剧恶变#*$!% # 扁平苔藓患者上 皮结构改变$对念珠菌抵抗力低下$另外治疗过程 中使用的药物也可能导致菌群失调$利于念珠菌的 增殖与入侵#’% # 白色念珠菌的入侵又可加剧黏膜充 血糜烂$因而扁平苔藓的治疗过程中抗真菌治疗也 是一个重要环节#"% # 随 机 扩 增 多 态 性 +,- #.$/% !012345 1567898:3 647;54 +,-$0-?+"是目前最常用的基因分型 方法# 它所需的 +,- 量少@快速简单$分辨力高# 口 腔白色念珠菌感染除与宿主全身及局部易感因素 有关外$ 与白色念珠菌本身的基因因素是否相关$ 一直是国内外未能解决的问题# 本文旨在通过白色 念珠菌 0-?+ 基因分型对健康者携带的白色念珠 菌共生菌%口腔扁平苔藓患者和口腔白色念珠菌感 染患者的白色念珠菌致病菌进行研究$对表型难以 区分的菌株作出基因分型$使口腔白色念珠菌分类 鉴定由表型向基因型深化$进而研究分析白色念珠 菌基因与扁平苔藓的关系$确定其感染来源为内源 性还是外源性$以期从基因分型水平为临床上制定 及时有效的防治措施提供可靠依据$并为口腔白色 念珠菌分子流行病学深入研究奠定基础#A% # ! 材料与方法 !"! 研究对象 共分 * 组$分别是口腔扁平苔藓组!B? 组"&$" 例$男 ! 例$女 $) 例’年龄 ’&".A 岁$平均年龄 ")C’ 岁#共生菌组!, 组"&A 例$男 * 例$女 " 例’年龄 !." .. 岁$平均年龄 "&C/ 岁# 口腔单纯白色念珠菌感染 组!DE 组"&)$ 例$男 . 例$女 $! 例’年龄 )’"/" 岁$ 平均 "$CA 岁# !"!"# 纳入标准 共生菌组菌株取自健康志愿者$ 要求近 * 个月未服用抗生素$无系统性疾病$无口 腔黏膜病# 其余 ) 组菌株来自 )&&$ 年 / 月")&&* 年 $ 月在我院口腔黏膜病专科就诊的 *" 例患者# !"# 菌株采集及培养鉴定保存 !"#"! 菌株采集及培养 共生菌组用含漱浓缩法采 取菌株$其余 ) 组用棉捻拭子法采取菌株#含漱浓缩 法&嘱健康志愿者用 $&57 无菌磷酸盐缓冲液充分含 漱 $582$收集含漱液$!&&& 1M:$美国 NOPH- 公司"菌体破壁K传统苯酚氯 仿混合提取法抽提 +,-# 采用分光光度计法测定 +,- 的纯度及含量# !"#"% 0-?+ 基因分型 根据 0-?+ 基因分型的原 则设计 & 对随机引物$ 引物 $&’(Q-EPPR-E-ERQ *($ 引物 )&’(QPRRREEPEEQ*(# 反应条件是 A!$ $ 582 变性$*"$ $ 582 退火$.)$ ) 582 延伸$!’ 个 循环后 .)$延伸 $& 582# 反应产物琼脂糖凝胶电 泳#应用数码成像系统对电泳凝胶拍照#电泳图谱用 德国 S:8MM 公司的 TN!&& *C&& 版本图像分析系统进 行分析# 该软件能分析同一张图片中任意 ) 条泳道 吴岚$ 等C 口腔白色念珠菌基因型与扁平苔藓的关系 UV B12K :L 17C 0:71L842M=86 W:LX::2 L=: I:24L;6: 49 E123831 17W8>12M 123 4=:2 6712YM )!"!)
上海口贮蛋724年12月第13粒第6期 .546 Shanghai Joumal c Srompology Val.15 No6 Decemher,204 问电泳系带的灰度、而积、密度，从而分析相互间的 005).即2组存在基因问源性。0C组与LP组相似 相似系数(S)。根据相似系数伉，结合肉限覆察，得 系数存在暴蒋性第异P<0001),即2组基因型相 出基因分型的结果。每张电泳图谱均以N组的N]3 似度不高。【P组与N组相似系数存在暴著性差异 为对照瓯。 (P✉0.001).即2组基因型相似度不高。 表L,OC胡铺体相拟系数值 2结果 Table 1.The Suef group OC (1)临床所取的46株菌中，有40株菌为白色 N31941112132145 13/ a860850850.910850750604 念环菌，其形态学观察及显色培养均符合白色么 05 /0730730010730620.6s 072 笛的特征。3组均有白色念珠僧之外的其伦类型念 3 085073/为0.四09085.8母L98 4 Q5Q730.9月 /0.9 090850.90.9% 珠曾存在。N组中1株签定为热带念珠菌.OC姐中 11 041091Q79029 ，079068071 079 4株，LP组中1株为不能鉴定出的色珠菌 12 Q5a73a9勇0明0.7910860.909 (2)白色色珠菌与其他念珠菌电冰图谱的区 13 Q73062Q8508506得086/.切07 21 07606509080 Q71080097, 090 别：白色念味荷RAPD基因图请在9Obp.50%p处 45084072098098079099087090/ 各显示1条高亮度条带（图1）：面其他念味南荷种 表2，OC州南味相拟系数值 具有独特型电泳图谱.其中5株不能整定出的念珠 Tahle 2.The So groep OC NI3 30 36 40 44 菌中有2株编号为19,43号茵基因图谱较相似（图 N13 095 085 089 0.96 Q45 2).分别在200p.300bp,500p处各是示1条高亮 15 095 082 a85 0.92 047 085 082 a9s 087 057 度条带，可能为问一药种。 30 36 089 085 096 0.92 00 452131211431N13M 40 u96 092 L87 Q见 7 4 045 047 037 040 047 1000tp 500p 素怎0C粗自株州似系数值 Table人.The Suof group OC N15 53 55 56 46 N13 u85 053 054 0.82 53 083 a65 065 0.8 图1,0C组国株状A电指孩西，品不的均为白色念珠百M为 55 053 065 099 060 NA分千量标记，N13为对所自 56 054 065 099 066 Fgure 1.Candida albicans KAPD identincation 46 0.32 0.98 Q69 066 表4.PH离杭相以系数慎 4340383501915N131 Tahle 4.The Sod grep IP 39 41 位 5054 N13/0430.100640.320430.350.23080 00p 290.43/Q1006行Q750.990.82 010054 500bp 2 0.00.10/010a100.100.100100.10 4064067010/Q5s00670.55015080 390320.73010030/0.15092Q10040 41 0.430201005509210.2010054 图之0C扫南株RPD告数国清。其中19.5号南为事白色老末 42 050201005500102y 010044 商非热营的念珠筒属南种，显不的四请较相饭，可院为网一商物。M 00.230.10010u.150100.100.10/ 0.10 为DNA分千量标记。N13为时夏南 540.004.0100800400.54044010 Figure 2 Candida RAPD identification 表天P细消株相做系数筒 (3)3组白色念味菊Sm结果分析：0C组白色念 Tahle天The S.of group I,P 未的与对照笛N13S平均值达079，且组内菌株 15 6 9 17 20 25 26 28 NI3 0.710980.5102n 0540.5306① 基园型相似度较高（表1~3）。1P组白色会味荫与对 6.71 L720.720270750.75 087 黑南N13S:平均值为0,49.且组内基因型较分散. 0.9路 0.72 0.52020 054 054 Q6配 170510.72052 03709506 083 基因型无问源性（表4,5）。N组白色念森与N13 230.2m 027020037 038 036 031 Sw平均值达0.75，组内幽株基因型相似度较高（表 25 0540.750540.9% 038 0转 a.87 m 053 075 054 036 090 07 6)。OC姐与N组间相似系数无显著性差异(P 280610706303031087Q3
间电泳条带的灰度!面积!密度"从而分析相互间的 相似系数#!"#$% 根据相似系数值"结合肉眼观察"得 出基因分型的结果& 每张电泳图谱均以 $ 组的 $%& 为对照菌& ! 结果 ’%$临床所取的 ’( 株菌中"有 ’) 株菌为白色 念珠菌"其形态学观察及显色培养均符合白色念珠 菌的特征& & 组均有白色念珠菌之外的其他类型念 珠菌存在& $ 组中 % 株鉴定为热带念珠菌"*+ 组中 ’ 株",- 组中 % 株为不能鉴定出的念珠菌& ’.$ 白色念珠菌与其他念珠菌电泳图谱的区 别(白色念珠菌 /"-0 基因图谱在 1))23)4))23 处 各显示 % 条高亮度条带’图 %$*而其他念珠菌菌种 具有独特型电泳图谱"其中 4 株不能鉴定出的念珠 菌中有 . 株编号为 %1)’& 号菌基因图谱较相似’图 .$"分别在 .))23)&))23)4))23 处各显示 % 条高亮 度条带"可能为同一菌种% ’&$& 组白色念珠菌 !56 结果分析(*+ 组白色念 珠菌与对照菌 $%& !56 平均值达 )781" 且组内菌株 基因型相似度较高’表 %!&$% ,- 组白色念珠菌与对 照菌 $%& !"6 平均值为 )7’1"且组内基因型较分散" 基因型无同源性’表 ’)4$% $ 组白色念珠菌与 $%& !"6 平均值达 )784"组内菌株基因型相似度较高’表 ($% *+ 组与 $ 组间相似系数无显著性差异 ’!9 )7)4$"即 . 组存在基因同源性% *+ 组与 ,- 组相似 系数存在显著性差异 :!;)7))% )78% )71= )74% )7.) )74’ )74& )7(% ( )78% > )78. )78. )7.8 )784 )784 )7=8 1 )71= )78. > )74. )7.) )74’ )74’ )7(& %8 )74% )78. )74. > )7&8 )71( )71( )7=& .& )7.) )7.8 )7.) )7&8 > )7&= )7&( )7&% .4 )74’ )784 )74’ )71( )7&= > )711 )7=8 .( )74& )784 )74’ )71( )7&( )711 > )7=8 .= )7(% )7=8 )7(& )7=& )7&% )7=8 )7=8 > $%& .1 &. &’ &1 ’% ’. 4) 4’ $%& > )7’& )7%) )7(’ )7&. )7’& )7&4 )7.& )7=) .1 )7’& > )7%) )7(8 )784 )711 )7=. )7%) )74’ &. )7%) )7%) > )7%) )7%) )7%) )7%) )7%) )7%) &’ )7(’ )7(8 )7%) > )74) )7(8 )744 )7%4 )7=) &1 )7&. )784 )7%) )74) > )784 )71. )7%) )7’) ’% )7’& )7=. )7%) )744 )71. > )7=. )7%) )74’ ’. )7&4 )7=. )7%) )744 )71. )7=. > )7%) )7’’ 4) )7.& )7%) )7%) )7%4 )7%) )7%) )7%) > )7%) 4’ )7=) )74’ )7%) )7=) )7’) )74’ )7’’ )7%) > $%& 4& 44 4( ’( $%& > )7=& )74& )74’ )7=. 4& )7=& > )7(4 )7(4 )71= 44 )74& )7(4 > )711 )7(( 4( )74’ )7(4 )711 > )7(( ’( )7=. )71= )7(1 )7(( > $%& %4 &) &( ’) ’’ $%& > )714 )7=4 )7=1 )71( )7’4 %4 )714 > )7=. )7=4 )71. )7’8 &) )7=4 )7=. > )71( )7=8 )7&8 &( )7=1 )7=4 )71( > )71. )7’) ’) )71( )71. )7=8 )71. > )7’8 ’’ )7’4 )7’8 )7&8 )7’) )7’8 > $%& % & ’ %% %. %& .% ’4 $%& > )7=( )7=4 )7=4 )71’ )7=4 )78& )78( )7=’ % )7=( > )78& )78& )71% )78& )7(. )7(4 )78. & )7=4 )78& > )711 )781 )711 )7=4 )7=1 )71= ’ )7=4 )78& )711 > )781 )711 )7=4 )7=1 )71= %% )71’ )71% )781 )781 > )781 )7(= )78% )781 %. )7=4 )78& )711 )711 )781 > )7=( )7=1 )711 %& )78& )7(. )7=4 )7=4 )7(= )7=( > )718 )7=8 .% )78( )7(4 )7=1 )7=1 )78% )7=1 )718 > )71) ’4 )7=’ )78. )71= )71= )781 )711 )7=8 )71) > 图 !" #$ 组菌株 %&’( 指纹图谱% 其中 )*)+, 号菌为非白色念珠 菌非热带的念珠菌属菌种"显示的图谱较相似"可能为同一菌种% - 为 (.& 分子量标记% ./, 为对照菌 012345 !" $678186 %&’( 185791:1;691?1;67@ %&’( 185791:1;6915 /= AB5 C&D 5 != AB5 C&D 5 ,= AB5 C&D 5 += AB5 C&D 5 G= AB5 C&D <: 24<3E F’ ’4 .% %& %. %% ’ & % $%& ? %))) 23 4)) 23 ’’ ’& ’) &= &4 &) %1 %4 $%& ? %))) 23 4)) 23 上海口腔医学 !""# 年 $! 月 第 !% 卷 第 & 期 +1#&, "#$%&#’( ’()*%$+ )* ",(-$,(+(&. /(+01% 2(0& +,-,./,03456#
美汽，等.口型白色老珠出蓝四型与利平若算竹我孤 WU Lan,.d土elgiemhip between the四ntype Cndida allica d eal lichen pl山rus -547- 素五N妇前降相配系数值 稳定性好，精确性高和分裤同种南株间养异的能力 Table 6.The Suer greup N 等优点，并可计算机辅助分析。 N13 NI 2 N3 N4 5N7 N13 0950.60 Q00.2 (2)念珠菌的基因分型可川于对菌种不明的菌 NI 080 0910.74Q74Q47 0.91 株的喜别和定位。本研究对46株荷进行表型分型。 N2 087091 081Q67052 0.2 发现可确定的白色多味南荷株为40株，热带念珠南 N3 093 074 081 055064 067 有1株(N9号药).尚有2.19.35.43,55号南不能讲 N4 060 074 Q67 055 0350. 别为刊种念珠菌属笛种。若用传就的YC酵母鉴定 1.60 07 052 064035 047 系统鉴别，不仅费时，操作复杂，而且结果不可靠， 0.72 001 082 067 082 047 对此可用基因分型作出鉴别。本实路通过基因分型 3讨论 发现219、35、43.55号菌显示其独特的指纹图谐， 其中19、43号曲指纹图增相似.可能为可一株陶，而 本实验所取的46株念珠酱有6株为非白色念 2,35,55号曾指纹图潜一致.可能也为另一菌种。将 珠曾的色珠菌种。该6株菌株分别取自6例不同 比指纹与现存的sene bank对服即可得出其窗种名 恋者。其中4例取自口腔念珠菌病唐者，1例取自扇 称，方法简便而且直接，易于推广。木研究提示，用 平苔背件发念珠菌感染惠者，1例收自健康人口腔。 随机引物℃R法在茵种水平区分念殊菌属是有可 临床上4削表现为口腔白色假膜，1剑表现为房部 能的。 充血、菱端，与急性假模性、装馏性白色念珠菌病临 (3)口控白色念珠菌共生菌与数病菌的基因型 床表现一数。从该所究分析可知，指床上所见的白 关系分析。口腔白色念珠菌共生菌间平均Sm达 色假膜状病变，并不能立即诊断为白色念珠菌感 0.75,以N组中的N13茵为对照菌，0C组中各个菌 染。念味荷属中除常无的白色念味南外，热带念珠 与对题南的平均S达0.79.说明0C组白色念珠南 南，近平滑念殊有，克柔氏念珠南等均有致病性。因 基因型分布具有一定的集中趋势，提示0汇组白色 而明镜鉴别珍断感染南种，为临束提高疗效，防止 念珠茵与N组白色念床菌基因具有同源性，口腔黏 附药菌株的出现有重要意义。 膜白色念珠南病的致病菌可能由共生菌转变面来， 通过对念味南表草签定可得出： 即内源性感染围。本研究采集的0C组21株南株， (1)形志学分型，显色培养只能将念珠南初步 有7株因服用仔上眼发质盖素后而引起念珠南感 箭速至有限的种水平，且精销度不岛.存在一定的 染，控断是患者在皮质弛素的作用下，机体免投受到 局限性。 抑制.从而使口腔齿肝失调，题发性造成口腔正常共 (2)LP组、0C阻各发现除白色多珠菌外的念珠 生曲群中的白色念珠菌成为感染源。 菌致消宦存在，因而明确诊斯对合理用药、顶防感 (4)口控白色念珠菌基因型与扁平首解的关系 染是必变的。 分析。对LP组感换白色念珠菌基因型分祈，发现其 (3)表型分型不能区分组间差异，也不能对白 基因型分布不具有集中趋势，且与N超白色念玩笛 色念珠菌连行遗传学分型，但对鉴定种间差异，特 基因型相制度不高。说明平苔群伴发白色念珠菌 别对于鉴定白色念珠菌感染，相对较简单、快速 与口腔正常共生白色老珠皙菌间基因型并无相关 通过对念珠菌RAD基因分型可得出： 性。因而扁平苔群唐者白色念张菌感染的迳径是否 (1)白色念珠菌的基因分型可使白色念珠黄分 与0C组一样属内题性，有待研究。一种可能的解样 类精确化。白色念味荷既可作为共生简存在，又是 是，口空扁平若韩件发的白色念味菌为外深在感染 种致病南。作为共生南与致病南存在的白色念床 白色念味南的定殖。白色念床药感染对于正常盐膜 菌，在表型分型上并无明显差别.且表型分举只能 可产生异常增生，对于存在异常增生的可加重其上 精确到种，面不能精确到型：并且鉴划力州，结果变 皮并常增生程度，因而慎助念珠菌感染，切断传搭途 异大，重复性荐，易受外部环歧的影响。本实第二 径，对于宿平苦藓患者非常重要。本研究发现.0汇 部分对白色念珠药进行的基因分型.结果证实是针 组和1P銅致病白色念味南基园亚并无相关性.为 对白色念珠菌核苷酸序列不可而进行的分型，具有 这种解释提供了依据
! 讨论 本实验所取的 !" 株念珠菌有 " 株为非白色念 珠菌的念珠菌菌种! 该 " 株菌株分别取自 " 例不同 患者! 其中 ! 例取自口腔念珠菌病患者"# 例取自扁 平苔藓伴发念珠菌感染患者"# 例取自健康人口腔! 临床上 ! 例表现为口腔白色假膜"# 例表现为腭部 充血#萎缩"与急性假膜性#萎缩性白色念珠菌病临 床表现一致! 从该研究分析可知"临床上所见的白 色假膜状病变" 并不能立即诊断为白色念珠菌感 染! 念珠菌属中除常见的白色念珠菌外"热带念珠 菌#近平滑念珠菌#克柔氏念珠菌等均有致病性! 因 而明确鉴别诊断感染菌种"为临床提高疗效"防止 耐药菌株的出现有重要意义! 通过对念珠菌表型鉴定可得出$ %#&形态学分型#显色培养只能将念珠菌初步 筛选至有限的种水平"且精确度不高"存在一定的 局限性! %$&%& 组#’( 组各发现除白色念珠菌外的念珠 菌致病菌存在"因而明确诊断对合理用药#预防感 染是必要的! %)&表型分型不能区分组间差异"也不能对白 色念珠菌进行遗传学分型" 但对鉴定种间差异"特 别对于鉴定白色念珠菌感染"相对较简单#快速! 通过对念珠菌 *+&, 基因分型可得出$ %-&白色念珠菌的基因分型可使白色念珠菌分 类精确化! 白色念珠菌既可作为共生菌存在"又是 一种致病菌! 作为共生菌与致病菌存在的白色念珠 菌"在表型分型上并无明显差别"且表型分型只能 精确到种"而不能精确到型’并且鉴别力弱"结果变 异大"重复性差"易受外部环境的影响! 本实验第二 部分对白色念珠菌进行的基因分型"结果证实是针 对白色念珠菌核苷酸序列不同而进行的分型"具有 稳定性好" 精确性高和分辨同种菌株间差异的能力 等优点"并可计算机辅助分析! %.&念珠菌的基因分型可用于对菌种不明的菌 株的鉴别和定位! 本研究对 !" 株菌进行表型分型" 发现可确定的白色念珠菌菌株为 !/ 株"热带念珠菌 有 # 株%01 号菌&"尚有 .##1#)2#!)#22 号菌不能辨 别为何种念珠菌属菌种!若用传统的 34( 酵母鉴定 系统鉴别5 不仅费时5 操作复杂5 而且结果不可靠" 对此可用基因分型作出鉴别! 本实验通过基因分型 发现 .##1#)2#!)#22 号菌显示其独特的指纹图谱" 其中 #1#!) 号菌指纹图谱相似"可能为同一株菌"而 .#)2#22 号菌指纹图谱一致"可能也为另一菌种! 将 此指纹与现存的 6787 9:8; 对照即可得出其菌种名 称5 方法简便而且直接5 易于推广! 本研究提示"用 随机引物 &(* 法在菌种水平区分念珠菌属是有可 能的+4 达 /?@2"以 0 组中的 0-) 菌为对照菌"’( 组中各个菌 与对照菌的平均 >+4 达 /A@1"说明 ’( 组白色念珠菌 基因型分布具有一定的集中趋势" 提示 ’( 组白色 念珠菌与 0 组白色念珠菌基因具有同源性"口腔黏 膜白色念珠菌病的致病菌可能由共生菌转变而来" 即内源性感染<-)= ! 本研究采集的 ’( 组 .- 株菌株" 有 -@ 株因服用肾上腺皮质激素后而引起念珠菌感 染"推断是患者在皮质激素的作用下"机体免疫受到 抑制"从而使口腔菌群失调"继发性造成口腔正常共 生菌群中的白色念珠菌成为感染源! %!&口腔白色念珠菌基因型与扁平苔藓的关系 分析! 对 %& 组感染白色念珠菌基因型分析"发现其 基因型分布不具有集中趋势"且与 0 组白色念珠菌 基因型相似度不高! 说明扁平苔藓伴发白色念珠菌 与口腔正常共生白色念珠菌菌间基因型并无相关 性! 因而扁平苔藓患者白色念珠菌感染的途径是否 与 ’( 组一样属内源性"有待研究! 一种可能的解释 是" 口腔扁平苔藓伴发的白色念珠菌为外源性感染 白色念珠菌的定殖! 白色念珠菌感染对于正常黏膜 可产生异常增生" 对于存在异常增生的可加重其上 皮异常增生程度"因而预防念珠菌感染"切断传播途 径" 对于扁平苔藓患者非常重要! 本研究发现"’( 组和 %& 组致病白色念珠菌基因型并无相关性"为 这种解释提供了依据! 0-) 0- 0. 0) 0! 02 0@ 0-) B /AC/ /AC@ /A1) /A"/ /A"/ /A@. 0- /AC/ B /A1- /A@! /A@! /A!@ /A1- 0. /AC@ /A1- B /AC- /A"@ /A2. /AC. 0) /A1) /A@! /AC- B /A22 /A"! /A"@ 0! /A"/ /A@! /A"@ /A22 B /A)2 /AC. 02 /A"/ /A!@ /A2. /A"! /A)2 B /A!@ 0@ /A@. /A1- /AC. /A"@ /AC. /A!@ B 表 !" # 组菌株相似系数值 $%&’( !" $)( *+, -. /0-12 # 吴岚" 等A 口腔白色念珠菌基因型与扁平苔藓的关系 DE %:85 7F :GA *7G:FHI8JKHL 97FM778 FK7 678IFNL7 IO (:8PHP: :G9HQ:8J :8P IR:G GHQK78 LG:8SJ (!"#(
上海口2送学23川年12月第13节第6别 …548· Shangha Joumal o Soomology Vol.13 No6 Deceaber.2001 周门amKY.fmF.nargive anys女of prtie varility 参考文献) aneng Cadile aliiouss isolates frun diffee gropaphie lsal ly three pemtypic mehub.JClin Microlil.1997.3501: Lipperheide V.Quisles C.Jimene Y.et ul Canlid biuypes in 132-136 patictes with tedl leulplakia and lichen pnuyoathalo Repr PD.ferker KS Esluatien of differestial pene espresion in .1s96,13429:75-82 fuumude-susceytilde and-teistan iselates d Catlida abi 阿 白天睡.流状竿规尺口触白色念肆成病学总1服，北《： cat b dNA nierearry inalysisL Antinicnb Agents 人民军保出版社.1995：10 wher.30m.4610:3412-417. 中划华，王沈开，素璃厘，等.白色念环笛感染对增生山巴君限 110 OhC,emorst R CHlloMeper Gamli山，a nen differertial 上皮的影响队中华口数层学表志，14,26：33现-41. idatim me peesaise ifici d clitcallyin [4]Rar A0.King-mill V].Speighe PM.The fenqaeney of fungal am Cardi山wio队JClin Micn,I9g,32周：192四- inferticn in hispins of eral mrod lirnsp]Or Dis.1998.4 199. 1:26-31. 门川亚当所，戈持造林，乳承，等.摩每通转学方法史验指调图第 同 沙月琴，孙正，佐仪等.口腔后平哲师的念我调多机中竿口 1版，比《：科学出版t,200=119. 曾属学衣，100,255列：97 12]liu D.Cnloe S.Jore 51.et al.Genmie sperifinein of Cardica Bank B.Caodida oolenoatae in drevre of the arl ncmal: indes by arbitneily peimrd polymrase chis reactian [FEMS clinical alurrvationJ Myrors,1991,34(1):87-89. i5lLrt,1996,14511):23-25 Halmerg K.Frram F.Exalutien an pliriaed qeem for rn- lee anplified pl小pheN4用A-nysf6 rgrnatypie [13]Vrimni G.Mateiala BP.Molela typing of Candida imees fnm pping of Camlid通s sroies l.J Clis小Ad.199%, ptonts bmpitaliand n an indessive ui J infeet,2001. 42410-50-56 10-59-m 《上海口腔医学》征订启事 《上海口腔医学》是由上海第二医科大学口腔医学院，上海市口整医学会共问土办的口腔医学综合性学 术期刊，是国内第一本全彩色印制的口腔医学专业杂志，由中国口腔医学界第一位工程院淀士邱前六敦授和 国内知名专家张震集.王大章，樊明文，周树夏，刘正教授相任顾问，张志服教授担任主编。杂志于1992年侧 刊.19%年却入(CNKI)(中国学术期刊光叠版CAJ-CD》.1999年被选入国家科技部中国科技论文统计源期 刊.并全文上网：2000年被美国《化学文摘)(CA)收录，2003年成为中国科技核心期刊，并核ndex Medic 和MEDLNE收录，本刊主要老目有基甜研究，临床研究、专栏论艺，临床总结，综透，学术讲座等，适宜干从 事口空医学的各级临床医师科研和教学人员参阅。本刊为双月刊，每24.6.8、10、12月末出版，标准大16 开，正文80页，全部采用铜版纸彩色（插图）印啊，无线装订，由廊局公开发行。国内统一刊号C下31-1705R. 国际标准刊号1SSN1006-7248.廊发代号4-561.定价8.00元.效迎广大读者订阅。外地错过廊局订期的读 者，可与编辑部直接联系。地址：200011上海市制造局路639号《上海口腔医学》架辑部。电话：021) 33183312.63121780.63138341-5271,传真：021)63121780.E-mil:sjsBoaschina.oag.e,shhkqyxzzh@olie sh.cn.网址：btp:hww.shkqyx-.periodicals.com.cm。 ,统计学小知识， 用于描述临床研究设计特征的术语 组闻平行比蚊一每一细被受一种不可的治疗，两沉网时开始进行研究：乐得陆零同两组比较进行分析。 配对比较一婆受不同治疗的研究对象被进行配对以平衡潜在的混桑因子，如年龄和性别：所得抽果用研究对象配对之何的差 外进行分所。 纤究对象白身比银—在治疗前和治疗后对纤究对像进行拉查，所得结装用断究对白身的变化进行分析。 单直一饼究对象不知道桂们碳发了等种治疗：双言 一所究对象不知道色门接受了第种治疗，纤完者也不知道：交 叉一每一个研定对象都振受干覆和对票治疗佩序采用新机方法)，其间经常用无治疗的空白南分丽。 安靴剂对强一对圆组厨定对象接受安靴剂无效荷片).安驱剂在外逐和味诺上应流与有效药片一样。安鞋（假）于术快可用于 外科临床试验。 因了设计一这种酊究可以允许技器预定站果对科以上各自独立的支量的作用无论是分离的还是联合约)进行研究。 例如22因了设计可以检验安数剂，单粮阿可区格、单独健帝前或闪可匹林抑链滋静在色性心脏病发作中的作用
!参考文献" !"# $%&&’()’%*’ +! ,-%.*/0 1!2%3’.’4 5!’6 789 :7.*%*7 ;%/6/&87>%7 7.* 8%?)’. &87.-0!2#9@ SR :7.*%*7 ?/8/.%476%/. %. *%0’70’0 /Z 6)’ /(78 3-?/078" ?8%.%?78 /;0’(a76%/.!2#R @’( VW9ca78-76%/. /Z *%ZZ’(’.6%78 A’.’ ’i&(’00%/. %. Z8-?/.74/8’L0-0?’&6%;8’ 7.*–(’0%067.6 %0/876’0 /Z :7.*%*7 78;%! ?7.0 ;[[<iR&’(%/*%?780R?/3R?.- .统计学小知识. 用于描述临床研究设计特征的术语 组间平行比较//每一组接受一种不同的治疗!两组同时开始进行研究+所得结果用两组比较进行分析- 配对比较//接受不同治疗的研究对象被进行配对以平衡潜在的混杂因子!如年龄和性别+所得结果用研究对象配对之间的差 异进行分析- 研究对象自身比较//在治疗前和治疗后对研究对象进行检查!所得结果用研究对象自身的变化进行分析- 单盲//研究对象不知道他们接受了哪种治疗+ 双盲//研究对象不知道他们接受了哪种治疗! 研究者也不知道+交 叉//每一个研究对象都接受干预和对照治疗P顺序采用随机方法I!其间经常用无治疗的空白期分隔- 安慰剂对照//对照组研究对象接受安慰剂P无效药片I!安慰剂在外观和味道上应该与有效药片一样- 安慰P假I手术也可用于 外科临床试验- 因子设计//这种研究可以允许按照预定结果对一种以上各自独立的变量的作用P无论是分离的还是联合的I进行研究- 例如!_#_ 因子设计可以检验安慰剂,单独阿司匹林,单独链激酶或阿司匹林加链激酶在急性心脏病发作中的作用- .1#2