实训指导 正常血组散形态观黎 实验准备 一。器材： 载装片 盖戒片： 滴管：4个 橡皮吸头：4个 玻璃棒：4根 烧杯：1000l,2个 量简，100a1、5300l,1000l各一 蜡笔 棕色小口瓶 眼休 载装片处果：一般将载玻片先用洗农粉水溶液煮沸0分钟，用流水冲洗，再经清洁液 浸泡过夜，用流水反复冲洗，最后入95酒精浸泡约1小时。取出，以洁净布巾夹持玻片边 缘擦干备用。 二，试剂： 瑞氏染液240如1 瑞氏染料粉剂 0.1g 纯甲醇(A服) 60ml 将粉剂放入洁净干燥黑体内，先加少量甲醇研磨使染料溶解，然后将己溶解的染料倒入 洁净的棕色玻璃瓶内，剩下来溶解的再加入少量甲醇研磨，如此反复，直至染料完全溶解为 止。新配制的染液需密封保存，室温放置1周后才能使用。染料存放越久，染色效果越好 磷酸盐缓冲液 1%KHPO. 30l 1%NxHPD, 20a1 加蒸情水至800l,调阳值到8.57.0，定容至1000加l, 甲醇
实训指导 正常血细胞形态观察 实验准备 一．器材： 载玻片 盖玻片： 滴管：4 个 橡皮吸头：4 个 玻璃棒：4 根 烧杯：1000 ml，2 个 量筒：100ml、500 ml、1000 ml 各一 蜡笔 棕色小口瓶 碾钵 载玻片处理：一般将载玻片先用洗衣粉水溶液煮沸 20 分钟，用流水冲洗，再经清洁液 浸泡过夜，用流水反复冲洗，最后入 95%酒精浸泡约 1 小时。取出，以洁净布巾夹持玻片边 缘擦干备用。 二．试剂： 瑞氏染液 240ml 瑞氏染料粉剂 0.1g 纯甲醇（AR） 60ml 将粉剂放入洁净干燥碾钵内，先加少量甲醇研磨使染料溶解，然后将已溶解的染料倒入 洁净的棕色玻璃瓶内，剩下未溶解的再加入少量甲醇研磨，如此反复，直至染料完全溶解为 止。新配制的染液需密封保存，室温放置 1 周后才能使用。染料存放越久，染色效果越好。 磷酸盐缓冲液 1%KH2PO4 30ml 1%Na2HPO4 20ml 加蒸馏水至 800 ml，调 PH 值到 6.5~7.0，定容至 1000ml。 甲醇
二甲苯 实验步骤 一，涂片 《一)血液涂片的制作 (1)需载玻片2张，分别称为玻片1和玻片2（裤片）： (2)用玻片1一端接约3▣直径的血滴，将此装片1保持水平。 (3)取另一边蜂平整的载装片2（推片），将其前端故在血滴前，与片1保持30°角 并稍向后移与血滴接触，即见血液沿片2（推片）下缘散开，使血液展开并充满整个推片的 宽度。 (4)立刻将推片与载玻片呈30°角，边轻压性片边将血1液按下图的箭头方向推动涂抹， 至血液铺完血粮为止， (5)挥动片1使血膜吹干，用蜡笔将血腹边缘圈黄备染色， (6)每只动物涂片一张。 (7)一素良好的血片，要求厚薄适宜，头、体、尾分明。 (8)置0ain-1hr后较利于观察红图型的形多. 面141直球片制作 商带装计料1的身内星名青面液龙请了形碳付的过 里后，这一定速喷件销本向帝成 注意事项： ·如标本本身太短，可观察的部分会受局限，故以在离开载玻片另一端2地方涂抹 为直。 ·载玻片、推片的角度越小。血液越薄：涂抹速度越慢、也越薄。在涂抹贫血病人的 血液时，将推片稍竖起（不是30°面是35°一0°左右），以较换的速度推比较好，而对红 细胞增高的病人则相反 。如用力过猛白细胞容易破损。 二。染色 (一)血液涂片的染色
二甲苯 实验步骤 一．涂片 （一）血液涂片的制作 （1）需载玻片 2 张，分别称为玻片 1 和玻片 2（推片）。 （2）用玻片 1 一端接约 3mm 直径的血滴，将此玻片 1 保持水平。 （3）取另一边缘平整的载玻片 2（推片），将其前端放在血滴前，与片 1 保持 30°角 并稍向后移与血滴接触，即见血液沿片 2（推片）下缘散开，使血液展开并充满整个推片的 宽度。 （4）立刻将推片与载玻片呈 30°角，边轻压推片边将血液按下图的箭头方向推动涂抹， 至血液铺完血膜为止。 （5）挥动片 1 使血膜吹干，用蜡笔将血膜边缘圈画备染色。 （6）每只动物涂片一张。 （7）一张良好的血片，要求厚薄适宜，头、体、尾分明。 （8）置 30min～1hr 后较利于观察红细胞的形态。 注意事项： ⚫ 如标本本身太短，可观察的部分会受局限，故以在离开载玻片另一端 2cm 地方涂抹 为宜。 ⚫ 载玻片、推片的角度越小、血液越薄；涂抹速度越慢、也越薄。在涂抹贫血病人的 血液时，将推片稍竖起（不是 30°而是 35°～40°左右），以较快的速度推比较好，而对红 细胞增高的病人则相反。 ⚫ 如用力过猛白细胞容易破损。 二．染色 （一）血液涂片的染色
(1)将待染涂片平政于染色架上。 (2)用滴管将染液滴于涂片上，覆盖整素涂片，放置1一3分钟。 《3)如入等量的磷酸缓冲凌或燕第水，与染液漫匀，可以用滴管从一端吸入，另一端 放出，混匀为止，或用嘴来日轻轻吹之，使之混匀，室温下染色5一10分钟（白细胞数多或 骨醋标本时间应长一线，如20一30ein). (4)染色结束时，先用燕销水或缓冲液洗将涂片上的染液直接冲掉。 (5)再将片子用自米水温和冲洗，至血液膜呈流红色， 《(6)甩干或腺干玻片。 (7)封片。 【染色原理】 1,瑞氏染料 是由酸性荣料伊红和碱性染料美数组成的复合染料。美模（又名亚甲蓝ehyleae blue) 为四甲基硫董染料，通常为氯盐，即氯化美蓝。伊红（又名曙红©osi)通常为的盐即们红 化钠。美直和伊红水溶液混合后产生一种情液性胶体伊红化美蓝中性沉淀。即瑞氏染料。瑞 氏染料溶于甲醇后重新解离为带正电的美蓝和带负电的伊红离子。 2.细胞的染色 既有物理性的吸附作用又有化学的亲和作用，各种细跑和细彩的各种成分化学性质不同 对各种染料的亲和力也不一样，因此用染色液染色后在同一血片上可以看见不同的色影， 例如： 一血红蛋白嗜酸性颗粒为碱性蛋白，与酸性染料伊红结合染成松红色称为一一酸性物 质。 ,细髓核蛋白和淋巴细围浆为酸性，与碱性染料美蓝成天青结合，染蓝色成紫色称为 一——碱性物质。 ?中性顾粒成等电状志与伊红和美蓝均可结合，染紫红色称为一一中性物顺。 3,P州对细鞋染色的影响 细原各种成分均由蛋自质构成，由于蛋白质系两性电解质，所带电荷随溶液阳而定， 在偏酸性环境中正电荷增多号与伊红结合染色偏红：在偏碱性环境中负电荷增多，易与美蓝 成天青结合，染色偏蓝，因此细脑染色对氢离子浓度十分敏感。在染色过程中玻片必须清洁： 配制瑞氏染液必须用优质甲醇，稀释染液必须用缓冲液，冲洗水应近中性。否则各种细胞染 色反应异常，致使细胞的识别困难，甚至适成情误
（1）将待染涂片平放于染色架上。 （2）用滴管将染液滴于涂片上，覆盖整张涂片，放置 1～3 分钟。 （3）加入等量的磷酸缓冲液或蒸馏水，与染液混匀，可以用滴管从一端吸入，另一端 放出，混匀为止，或用嘴来回轻轻吹之，使之混匀，室温下染色 5～10 分钟（白细胞数多或 骨髓标本时间应长一些，如 20～30min）。 （4）染色结束时，先用蒸馏水或缓冲液洗将涂片上的染液直接冲掉。 （5）再将片子用自来水温和冲洗，至血液膜呈淡红色。 （6）甩干或晾干玻片。 （7）封片。 【染色原理】 1．瑞氏染料 是由酸性染料伊红和碱性染料美蓝组成的复合染料。美蓝（又名亚甲蓝 mehyleme blue） 为四甲基硫堇染料，通常为氯盐，即氯化美蓝。伊红（又名曙红 eosin）通常为钠盐即伊红 化钠。美蓝和伊红水溶液混合后产生一种憎液性胶体伊红化美蓝中性沉淀，即瑞氏染料。瑞 氏染料溶于甲醇后重新解离为带正电的美蓝和带负电的伊红离子。 2．细胞的染色 既有物理性的吸附作用又有化学的亲和作用，各种细胞和细胞的各种成分化学性质不同 对各种染料的亲和力也不一样，因此用染色液染色后在同一血片上可以看见不同的色彩。 例如： ➢ 血红蛋白嗜酸性颗粒为碱性蛋白，与酸性染料伊红结合染成粉红色称为——酸性物 质。 ➢ 细胞核蛋白和淋巴细胞浆为酸性，与碱性染料美蓝或天青结合，染蓝色或紫色称为 ——碱性物质。 ➢ 中性颗粒成等电状态与伊红和美蓝均可结合，染紫红色称为——中性物质。 3．PH 对细胞染色的影响 细胞各种成分均由蛋白质构成，由于蛋白质系两性电解质，所带电荷随溶液 PH 而定， 在偏酸性环境中正电荷增多易与伊红结合染色偏红；在偏碱性环境中负电荷增多，易与美蓝 或天青结合，染色偏蓝，因此细胞染色对氢离子浓度十分敏感，在染色过程中玻片必须清洁， 配制瑞氏染液必须用优质甲醇，稀释染液必须用缓冲液，冲洗水应近中性，否则各种细胞染 色反应异常，致使细胞的识别困难，甚至造成错误
【血细胞发育规律】 血细数在分化成熟过程中，其形态和大小的变化基本上有一个共同的规律： 1,围体，随着血细融的发育成熟，融体由大逐渐变小，但巨核细胞系统则由小变大， 原始救细胞至早幼粒细胞也逐有由小变大， 2.園核 (1)大小：由大变小，但红细胞系统例外，成热红细胞核消失。 (2)形状：圆形变为不规则形：较细胞核里分叶状：淋巴与浆细胞系统变化不大， (3)染色质：细致、疏松逐渐变为粗陆、紧密。 (4)核颗：不明显变为明显：原淋巴细胞核膜最厚：原幼粒细胞核围最薄：原珀单核 细型介于两者之间， (5)核仁，由有至无。清楚的核仁是原始和比较凰始细鞋的重要标记，星淡蓝色。面 着细胞的成熟而消失。 3.胞浆 (1)量：有少到多 (2)颜色：深蓝到找蓝，见于淋巴细胞与浆细围。红细粮与粒细胞的散聚各逐渐变成 枯红和粉红色。 《3)颗粒：一般从无到少并逐渐增多。较细胞系统由少量的嘻天青顾粒递渐代之以大 量中性，墙酸和嗜碱颗粒。 (4)胞核与胞浆体机之比：由大到小。 血涂片的观素方法 1,肉眼现察 在观察染色标本时，首先用肉眼对颜色进行观察。如果是正常的来梢血液则呈粉红色， 白血病时白细胞高度增加或骨筒箱的高Y球蛋白血症等情况下，血涂片会带有茧色〔如下图 1-4-1),此时应意识到为异常标本， 2.高倍镜下观察 首先观察血涂片制备和荣色是否良好、细胞分布是否均匀，同时可估计白细胞数量增减 情况，最后对血涂片的体尾交界的区域进行观察，选择细胞分都均匀不重叠，标本不太厚容 易观察的地方进行油镜观黎（知图1-42）
【血细胞发育规律】 血细胞在分化成熟过程中，其形态和大小的变化基本上有一个共同的规律： 1．胞体：随着血细胞的发育成熟，胞体由大逐渐变小，但巨核细胞系统则由小变大， 原始粒细胞至早幼粒细胞也逐渐由小变大。 2．胞核 （1）大小：由大变小，但红细胞系统例外，成熟红细胞核消失。 （2）形状：圆形变为不规则形；粒细胞核呈分叶状；淋巴与浆细胞系统变化不大。 （3）染色质：细致、疏松逐渐变为粗糙、紧密。 （4）核膜：不明显变为明显；原淋巴细胞核膜最厚；原幼粒细胞核膜最薄；原始单核 细胞介于两者之间。 （5）核仁：由有至无。清楚的核仁是原始和比较原始细胞的重要标记，呈淡蓝色，随 着细胞的成熟而消失。 3．胞浆 （1）量：有少到多。 （2）颜色：深蓝到浅蓝，见于淋巴细胞与浆细胞。红细胞与粒细胞的胞浆各逐渐变成 桔红和粉红色。 （3）颗粒：一般从无到少并逐渐增多。粒细胞系统由少量的嗜天青颗粒逐渐代之以大 量中性、嗜酸和嗜碱颗粒。 （4）胞核与胞浆体积之比：由大到小。 血涂片的观察方法 1．肉眼观察 在观察染色标本时，首先用肉眼对颜色进行观察。如果是正常的末梢血液则呈粉红色， 白血病时白细胞高度增加或骨髓瘤的高γ球蛋白血症等情况下，血涂片会带有蓝色（如下图 1-4-1），此时应意识到为异常标本。 2．高倍镜下观察 首先观察血涂片制备和染色是否良好、细胞分布是否均匀，同时可估计白细胞数量增减 情况。最后对血涂片的体尾交界的区域进行观察，选择细胞分布均匀不重叠、标本不太厚容 易观察的地方进行油镜观察（如图 1-4-2）
3,油镜下观察边移动视野边观察下列各项： 1)染色是香良好：如果血涂片染色确实不好。应重新染色， 2)观黎红细鞋形态 (1)有无人为造成的变形，此外有时载玻片上的碱性物质的溶出（骏璃效应）会导政 红细胞呈严重的棘形红细胞。如固定不良（固定表中含有水分时）会导致呈面包周形红细胞， 从而无法观察红细脑的形老， (2)大小如何，是大细胞还是小细胞。有无红细散大小不一。 (3)形态如何，注意有无畸形红细胞、球形红细胞、树圆新红细胞。靶形红细胞、口 形红细胞（居形红细胞）入，中心淡袋色红细胞，辣形红细胞、胆状红细胞、装缩红细胞、泪 滴状红细围、破碎红细胞及擦状红细围等。 《4)是否有染色性的变化，有无唱多色性红细胞，中心该染红细胞。 (5)红细胞内有无异常，观察是否有嗜碱性点影、幸-乔小体、卡波环状体红细胞、纺 红细照、帕彭海娟氏小体和疟源虫的出现。 (6)有关大小不一，畸形和嗜多色性，可分为轻度士、中度+、高度三个级别· 3)观察白饵胞形态 《1)与红细围比较，判断白细鞋数是否正常，是否增加暖减少。红细围数/白细鞋数约 为800：1. (2)有关白细胞的种类。要观黎大量的白细胞后才可判断是否异常，然后计算白细鞋 的百分率。在日常检查中，一般只计算100个，但是发现异常成白细鞋有增加时，尽量增加 到00个。计算的自细胞数感多，白细胞百分率的可信度越高。 4)观察血小板形态 《1)通过与红细胞的比较，判断血小板数量是否正常，是增如或减少。正常情况下每 15~20个红细胞中有1个血小板， (2)注意大小的变化. (3)观察未如抗凝剂面直接从毛细血管采集的标本时，要注意血小板的凝集性（观察 由若干血小板凝集的现象。如果呈散在状，则怀疑为血小板无力症)。 (4)观察有无赛生虫，当白细型碱低成白钲胞分莞中单核细型增多时，应注竞观察红 细胞内有无疟原虫
3．油镜下观察 边移动视野边观察下列各项： 1）染色是否良好：如果血涂片染色确实不好，应重新染色。 2）观察红细胞形态： （1）有无人为造成的变形，此外有时载玻片上的碱性物质的溶出（玻璃效应）会导致 红细胞呈严重的棘形红细胞。如固定不良（固定液中含有水分时）会导致呈面包圈形红细胞， 从而无法观察红细胞的形态。 （2）大小如何，是大细胞还是小细胞，有无红细胞大小不一。 （3）形态如何，注意有无畸形红细胞、球形红细胞、椭圆新红细胞、靶形红细胞、口 形红细胞（唇形红细胞）、中心淡染色红细胞、棘形红细胞、胆状红细胞、皱缩红细胞、泪 滴状红细胞、破碎红细胞及镰状红细胞等。 （4）是否有染色性的变化，有无嗜多色性红细胞，中心淡染红细胞。 （5）红细胞内有无异常。观察是否有嗜碱性点彩、豪-乔小体、卡波环状体红细胞、幼 红细胞、帕彭海姆氏小体和疟原虫的出现。 （6）有关大小不一，畸形和嗜多色性，可分为轻度±、中度++、高度三个级别。 3）观察白细胞形态 （1）与红细胞比较，判断白细胞数是否正常，是否增加或减少。红细胞数/白细胞数约 为 500：1。 （2）有关白细胞的种类，要观察大量的白细胞后才可判断是否异常，然后计算白细胞 的百分率。在日常检查中，一般只计算 100 个，但是发现异常或白细胞有增加时，尽量增加 到 200 个。计算的白细胞数越多，白细胞百分率的可信度越高。 4）观察血小板形态 （1）通过与红细胞的比较，判断血小板数量是否正常，是增加或减少。正常情况下每 15～20 个红细胞中有 1 个血小板。 （2）注意大小的变化。 （3）观察未加抗凝剂而直接从毛细血管采集的标本时，要注意血小板的凝集性（观察 由若干血小板凝集的现象。如果呈散在状，则怀疑为血小板无力症）。 （4）观察有无寄生虫，当白细胞减低或白细胞分类中单核细胞增多时，应注意观察红 细胞内有无疟原虫
注意事项： 1.染色涂片水冲洗后，应在空气中自然干燥或风干，不可用火烤干。 2.染液量要充足，勿使染液痛发干燥。 3.细胞染色过浅域过深。特标本干燥后，文即用瑞氏染液或甲醇重新染色数秒域数分 钟。 4,候存过久的细胞涂片，饵胞染色会退色，可重新染色， 5.新鲜徐片应立即染色. 血液涂片和骨菌涂片的观黎内容 血液涂片：选择10个视野，每个程野内红细的数量大致相同，观黎红细胞的持列， 分布及形态，白细胞的数量及核的变化。 骨随象中类仪细胞的鉴别 实验准备 一.器材： 载我片 盖玻片： 滴管：4个 橡皮吸头：4个 玻璃棒：4根 烧杯，1000ml,2个 量篇：100al、500l、10001各一 蜡笔 棕色小口靠 限体
注意事项： 1．染色涂片水冲洗后，应在空气中自然干燥或风干，不可用火烤干。 2．染液量要充足，勿使染液蒸发干燥。 3．细胞染色过浅或过深，待标本干燥后，立即用瑞氏染液或甲醇重新染色数秒或数分 钟。 4．保存过久的细胞涂片，细胞染色会退色，可重新染色。 5．新鲜涂片应立即染色。 血液涂片和骨髓涂片的观察内容 血液涂片：选择 10 个视野，每个视野内红细胞的数量大致相同，观察红细胞的排列、 分布及形态，白细胞的数量及核的变化。 骨髓象中类似细胞的鉴别 实验准备 一．器材： 载玻片 盖玻片： 滴管：4 个 橡皮吸头：4 个 玻璃棒：4 根 烧杯：1000 ml，2 个 量筒：100ml、500 ml、1000 ml 各一 蜡笔 棕色小口瓶 碾钵
载装片处理：一般将载玻片先用洗衣粉水溶液煮沸0分钟，用流水冲洗，再经清洁液 浸泡过夜，用流水反复冲洗，最后入9酒精浸泡约1小时，取出，以洁净布巾夹持骏片边 缘擦干备用。 二，试剂 瑞氏染液240如1 瑞氏桌料粉剂 0.1g 纯甲醇(A极) 60ml 将粉剂政入洁净干燥鼎林内，先加少量甲醇研磨使染料溶解，然后将已溶解的染韩倒入 洁净的棕色玻璃瓶内。剩下未溶解的再加入少量甲醇研磨，如此反复，直至染料完全溶解为 止。新配制的染液雷密封保存，室温放置1周后才脆使用。染料存放越久，染色效果越好。 磷酸盐缓冲液 1P0 30a1 1%Na.HPO, 20a1 加燕销水至800l,调阳值到6.57.0，定容至1000加l. 甲醇 二甲苯 实数步骤 一。涂片 《一》血液涂片的制作 (1)需找玻片2张，分别称为玻片1和玻片2（推片》. (2)用玻片1一端接的3m直径的血满，将此拔片1保持水平。 (3)取另一边缘平整的载玻片2（推片），将其前端放在血滴简，与片1保持30 角并稍向后移与血滴接触，即见血液沿片2（推片）下撞散开，使血液展开并充满整 个推片的宽度。 (4)立刻将推片与载玻片呈3即°角，边轻压推片边将血液按下图的箭头方向推 动涂抹。至血液铺完血膜为止。 (5)挥动片1使血限吹干。用蜡笔将血限边锋圈西备染色。 (6)每只动物徐片一张。 (T)一张良好的血片，要求厚薄适宜，头、体、尾分明： (8)置30min一1hr后较利于观黎红细散的形态
载玻片处理：一般将载玻片先用洗衣粉水溶液煮沸 20 分钟，用流水冲洗，再经清洁液 浸泡过夜，用流水反复冲洗，最后入 95%酒精浸泡约 1 小时。取出，以洁净布巾夹持玻片边 缘擦干备用。 二．试剂： 瑞氏染液 240ml 瑞氏染料粉剂 0.1g 纯甲醇（AR） 60ml 将粉剂放入洁净干燥碾钵内，先加少量甲醇研磨使染料溶解，然后将已溶解的染料倒入 洁净的棕色玻璃瓶内，剩下未溶解的再加入少量甲醇研磨，如此反复，直至染料完全溶解为 止。新配制的染液需密封保存，室温放置 1 周后才能使用。染料存放越久，染色效果越好。 磷酸盐缓冲液 1%KH2PO4 30ml 1%Na2HPO4 20ml 加蒸馏水至 800 ml，调 PH 值到 6.5~7.0，定容至 1000ml。 甲醇 二甲苯 实验步骤 一．涂片 （一）血液涂片的制作 （1）需载玻片 2 张，分别称为玻片 1 和玻片 2（推片）。 （2）用玻片 1 一端接约 3mm 直径的血滴，将此玻片 1 保持水平。 （3）取另一边缘平整的载玻片 2（推片），将其前端放在血滴前，与片 1 保持 30° 角并稍向后移与血滴接触，即见血液沿片 2（推片）下缘散开，使血液展开并充满整 个推片的宽度。 （4）立刻将推片与载玻片呈 30°角，边轻压推片边将血液按下图的箭头方向推 动涂抹，至血液铺完血膜为止。 （5）挥动片 1 使血膜吹干，用蜡笔将血膜边缘圈画备染色。 （6）每只动物涂片一张。 （7）一张良好的血片，要求厚薄适宜，头、体、尾分明。 （8）置 30min～1hr 后较利于观察红细胞的形态
图5+1志拿时制作 称植道料州1的古利销轴问，当在城光法了带调师的室 度后，程一克速度2的向前结 注意事项： ·如标本本身太短，可观斯的部分会受同限，故以在离开载破片另一端2■地方涂抹 为直。 ·载玻片，推片的角度越小，血液越薄：涂抹速度越慢、也越薄。在涂抹贫血病人的 血液时，将推片稍竖起（不是30°而是35°一0°左右），以较快的速度推比较好，而对红 细胞增高的病人则相反。 ·如用力过猛白细胞容易破损。 二，染色 (一)血液涂片的染色 (1)将待染涂片平放于染色架上， (2)用滴管将桌液滴于涂片上。覆盖整张涂片，放置1一3分钟。 《(3)加入等量的晴酸缓冲液或燕管水，与染液混匀，可以用滴管从一端吸入，另一端 放出，混匀为止，或用嘴来日轻轻吹之，使之混匀，室温下染色5一10分钟（白氧胞数多或 骨随标本时问应长一生，如20一30a1n). ()染色结束时，先用燕情水暖缓冲液洗将涂片上的染液直接冲算。 (5)再将片子用自来水温和冲洗，至血液膜呈淡红色。 《(6)甩干或腺干玻片， (7)封片。 【染色原理】 1.瑞氏染料 是由酸性荣料伊红和碱性染料美茧组成的复合染料。美蓝（又名亚甲蓝ehyleae blu©） 为四甲基硫董染料，通常为氧盐，即氧化美蓝。伊红（又名喝红eosi)通常为的盐即伊红 化钠。美蓝和伊红水溶液混合后产生一种情液性胶体伊红化美蓝中性沉淀，即璃氏染料。璃 氏染料溶于甲醇后重新解离为带正电的美蓝和蒂负电的伊红离子
注意事项： ⚫ 如标本本身太短，可观察的部分会受局限，故以在离开载玻片另一端 2cm 地方涂抹 为宜。 ⚫ 载玻片、推片的角度越小、血液越薄；涂抹速度越慢、也越薄。在涂抹贫血病人的 血液时，将推片稍竖起（不是 30°而是 35°～40°左右），以较快的速度推比较好，而对红 细胞增高的病人则相反。 ⚫ 如用力过猛白细胞容易破损。 二．染色 （一）血液涂片的染色 （1）将待染涂片平放于染色架上。 （2）用滴管将染液滴于涂片上，覆盖整张涂片，放置 1～3 分钟。 （3）加入等量的磷酸缓冲液或蒸馏水，与染液混匀，可以用滴管从一端吸入，另一端 放出，混匀为止，或用嘴来回轻轻吹之，使之混匀，室温下染色 5～10 分钟（白细胞数多或 骨髓标本时间应长一些，如 20～30min）。 （4）染色结束时，先用蒸馏水或缓冲液洗将涂片上的染液直接冲掉。 （5）再将片子用自来水温和冲洗，至血液膜呈淡红色。 （6）甩干或晾干玻片。 （7）封片。 【染色原理】 1．瑞氏染料 是由酸性染料伊红和碱性染料美蓝组成的复合染料。美蓝（又名亚甲蓝 mehyleme blue） 为四甲基硫堇染料，通常为氯盐，即氯化美蓝。伊红（又名曙红 eosin）通常为钠盐即伊红 化钠。美蓝和伊红水溶液混合后产生一种憎液性胶体伊红化美蓝中性沉淀，即瑞氏染料。瑞 氏染料溶于甲醇后重新解离为带正电的美蓝和带负电的伊红离子
2.细胞的染色 臣有物理性的吸附作用又有化学的亲和作用，各种细胞和细散的各种成分化学性质不同 对各种染料的亲和力也不一样，因此用染色液染色后在同一血片上可以看见不同的色彩。 例如： ,鱼红蛋白嗜酸性颗粒为碱性蛋白，与酸性染料伊红结合染成粉红色称为一一酸性物 质。 。饵胞核蛋白和淋巴细图浆为酸性，与碱性染料美蓝或天青结合，染蓝色或紫色称为 ——碱性物质。 ·中性颗校成等电状态与伊红和美蓝均可结合，染紫红色称为一中性物质。 3,P用对细胞染色的影响 细胞各种成分均由蛋白质构成。由于蛋白质系两性电解质，所带电背随溶液州而定， 在偏酸性环境中正电荷增多易与伊红结合染色偏红：在偏碱性环境中负电荷增多，易与美置 或天青结合，染色偏蓝，因此细胞染色对氢离子浓度十分敏感，在染色过程中破片必须清洁， 配制瑞氏染液必须用优质甲醇，稀释染液必须用缓冲液，冲法水应近中性。否测各种细融染 色反应异常，致使细胞的棋别用难，甚至造成情误。 骨简涂片：全面观察成然红细胞与有核细胞的大改比例，以确定增生度。分缓标准见表： 级别 增生度 成熟红细围/有核细散 常见原因 增生极度活跃 12/1 白血病 增生明显活跃 10/1 白血病，增生性贫血 面 增生话跃 20^30/1 正常骨髓成某些贫血 W 增生减低 50/1 造直功能低下 增生严置减低 300/1 再生障得性红血 红细胞发生过程的形态流变 发育阶段和名 胞体 胞楼 胞质 称 大小形 形状染色质核仁核 嗜碱性着色血红蛋白分鬓能力 状 质比 (μ■) 原始阶段原红 14-22 圆细粒状2-3>3 强 水 细胞 团 /4 整 无 有 幼早幼红细胞 11-19 圆相粒状偶见>1/2 很强墨水蓝开始出现 有 霍中幼红细酸 圆 圆相块状消失钓1 减弱墙多染性增多 弱 阶晚幼红细胞 10-14 /2 红蓝问荣 段 圆 圆改密块消失更小 到 红 大 成 9~12 无 量 无 熟网织红细胞 围 无
2．细胞的染色 既有物理性的吸附作用又有化学的亲和作用，各种细胞和细胞的各种成分化学性质不同 对各种染料的亲和力也不一样，因此用染色液染色后在同一血片上可以看见不同的色彩。 例如： ➢ 血红蛋白嗜酸性颗粒为碱性蛋白，与酸性染料伊红结合染成粉红色称为——酸性物 质。 ➢ 细胞核蛋白和淋巴细胞浆为酸性，与碱性染料美蓝或天青结合，染蓝色或紫色称为 ——碱性物质。 ➢ 中性颗粒成等电状态与伊红和美蓝均可结合，染紫红色称为——中性物质。 3．PH 对细胞染色的影响 细胞各种成分均由蛋白质构成，由于蛋白质系两性电解质，所带电荷随溶液 PH 而定， 在偏酸性环境中正电荷增多易与伊红结合染色偏红；在偏碱性环境中负电荷增多，易与美蓝 或天青结合，染色偏蓝，因此细胞染色对氢离子浓度十分敏感，在染色过程中玻片必须清洁， 配制瑞氏染液必须用优质甲醇，稀释染液必须用缓冲液，冲洗水应近中性，否则各种细胞染 色反应异常，致使细胞的识别困难，甚至造成错误。 骨髓涂片：全面观察成熟红细胞与有核细胞的大致比例，以确定增生度。分级标准见表： 级别 增生度 成熟红细胞/有核细胞 常见原因 Ⅰ 增生极度活跃 1~2/1 白血病 Ⅱ 增生明显活跃 10/1 白血病、增生性贫血 Ⅲ 增生活跃 20~30/1 正常骨髓或某些贫血 Ⅳ 增生减低 50/1 造血功能低下 Ⅴ 增生严重减低 300/1 再生障碍性贫血 红细胞发生过程的形态演变 发育阶 段和名 称 胞体 大小 形 状 （μm） 胞核 形状 染色质 核仁核 质比 胞 质 嗜碱性 着色血红蛋白 分裂能力 原始阶段 原红 细胞 幼早幼红细胞 稚 中幼红细胞 阶 晚幼红细胞 段 成 熟 网织红细胞 14 ～ 22 圆 11～19 圆 10～14 圆 9～12 圆 圆 细粒状 2～3 > 3 ／4 圆粗粒状 偶见 >1／2 圆 粗块状 消失 约 1 ／2 圆 致密块 消失 更小 无 无 强 墨 水 蓝 无 有 很强墨水蓝 开始出现 有 减弱 嗜多染性 增多 弱 红蓝间染 弱 红 大 量 无
阶红细围 7-9圆 段 盘状 微 大 7圆世 量 无 状 无 红 大 量 无 粒细雕雅发生过程的形老流变 发育 围体 腹核 粒质 阶段和 大小 形状染色质核仁核顺 嗜碱性着色嗜天青特 名称 形状 比 殊分裂 ( 例 颗 面》 粒 颗粒能力 原始阶 11- 圆细网状2-6)3/4 强 天 段单 18图 卵圆粗网状锡见>1/2 技 无有 粒细胞 13- 半圆网块状消失约1/2 减竭淡拉大量少量有 幼早 20M 肾形网块状消(1/2 羽浅蓝少增多有 幼校细 11- 带状粗块状清失(1/3 极露浅红少明显无 胞 16 分叶相块状消失更小 消失淡红少大量无 程中 10= 消失流红少大量无 幼校细 15圆 胞 10- 阶晚 15周 幼校细 10- 胞 15周 段 成 熟杆 状核粒 细胞 阶分 叶核粒 细围 段 骨植象检查方法 实验准备 一。器材： 载支片 盖装片：
阶 红细胞 段 7～9 圆 盘状 7 圆盘 状 微 红 大 量 无 无 红 大 量 无 粒细胞发生过程的形态演变 发 育 阶段和 名称 胞体 大小 形状 （μ m） 胞 核 形状 染色质 核仁 核质 比 例 胞 质 嗜碱性 着色 嗜天青 特 殊 分裂 颗 粒 颗粒 能力 原始阶 段 原 粒细胞 幼 早 幼粒细 胞 稚 中 幼粒细 胞 阶 晚 幼粒细 胞 段 成 熟 杆 状核粒 细胞 阶 分 叶核粒 细胞 段 11 － 18 圆 13－ 20 圆 11－ 16 圆 10－ 15 圆 10－ 15 圆 10－ 15 圆 圆 细网状 2－6 >3／4 卵圆 粗网状 偶见 >1／2 半圆 网块状 消失 约 1／2 肾形 网块状 消失 <1／2 带状 粗块状 消失 <1／3 分叶 粗块状 消失 更小 强 天 蓝 无 无 有 减弱淡蓝 大量 少量 有 弱 浅蓝 少 增多 有 极弱 浅红 少 明显 无 消失 淡红 少 大量 无 消失 淡红 少 大量 无 骨髓象检查方法 实验准备 一．器材： 载玻片 盖玻片：