重庆医药高等专科学校教案（首页） 课程 《药品生物检定技术》 单元（章） 综合实训项目九 课题：综合实训项川九氯化的注射液的无菌检查《在药检所及药 厂完成实酒) 学时 教学变源：《药品生物检定技术》李检梅主编。化学工业出板社，国家援划教村 教学类型：实巢技能训练 教学方法： 直观教学法，情境教学法，案例教学法，角色转换教学法，启发引导教学法 专业班次 授课日期 知识与能力要来： 1、能使用《中国药奥》《中国药品检验操作规范)，根据药品种类角定药品的微生物检验 项目。 2、能根据采样规定，正确采集与处理样品。 3、会用源粮过滤法对含灭南成份的水溶性制剂进行无菌检查 重难点： 重点：氯化的注射液的无两校查（薄展过滤法） 难点：抗生素效价的测定 课后记 任课老师： 年月日 散研室主任： 年月日
重庆医药高等专科学校教案（首页） 课程 《药品生物检定技术》 单元（章） 综合实训项目九 课题：综合实训项目九 氯化钠注射液的无菌检查（在药检所及药 厂完成实训） 学时 8 教学资源：《药品生物检定技术》李榆梅主编，化学工业出版社，国家规划教材 教学类型： 实验技能训练 教学方法： 直观教学法、情境教学法、案例教学法、角色转换教学法、启发引导教学法 专业班次 授课日期 知识与能力要求： 1、能使用《中国药典》《中国药品检验操作规范》，根据药品种类确定药品的微生物检验 项目。 2、能根据采样规定，正确采集与处理样品。 3、会用薄膜过滤法对含灭菌成份的水溶性制剂进行无菌检查 重难点： 重点：氯化钠注射液的无菌检查（薄膜过滤法） 难点：抗生素效价的测定 课后记： 任课老师 ： 年 月 日 教研室主任: 年 月 日
敦学内容及方法 备注 综合实训项目九氯化钠注射液的无菌检查（在药检所及 药厂完成实训) 教学设计： 课前准备： 一，布置实训任务（上次课结束前布置） 二、小组分工： 各班分成2个大组。每大组8个小组，每小组34人。 三、学生自主学习并完成实训方案的设计： 1、《查询中国药典》《中国药品检验操作规范》，确定检验项目及检 验方法 2、小组讨论，列出需要准备的实验用物 3、确定检验程序 4、设计实训方案（包括检验步骤、材料准备、时间安排，工作流 程，组内任务分工等，要求内容详实)。 四、老师检查实训方案 老师利用课外时间检查学生实训方案，不符合要求的责令重新修 定，直到合格为止。 上课安排 第一次课(40分钟) 一，老师评价学生设计的实训方案，并提出参考方案(20分钟) 二、观看规范的操作录像，解释操作细节及注意事项。(20分钟) 第二次课(3节，120分钟) 一，配制所需的培养基。按要求灭菌：准备实验材料（需灭菌的夏 同时灭菌)， (80分钟》 1、仪器：智能集菌仪，智能集菌器（无菌） 2、培养基：
教 学 内 容 及 方 法 备 注 综合实训项目九 氯化钠注射液的无菌检查（在药检所及 药厂完成实训） 教学设计： 课前准备： 一、布置实训任务（上次课结束前布置） 二、小组分工： 各班分成 2 个大组，每大组 8 个小组，每小组 3-4 人。 三、学生自主学习并完成实训方案的设计： 1、《查询中国药典》《中国药品检验操作规范》，确定检验项目及检 验方法 2、小组讨论，列出需要准备的实验用物 3、确定检验程序 4、设计实训方案（包括检验步骤、材料准备、时间安排，工作流 程，组内任务分工等，要求内容详实）。 四、老师检查实训方案 老师利用课外时间检查学生实训方案，不符合要求的责令重新修 定，直到合格为止。 上课安排 第一次课（40 分钟） 一、老师评价学生设计的实训方案，并提出参考方案（20 分钟） 二、观看规范的操作录像，解释操作细节及注意事项。（20 分钟） 第二次课（3 节，120 分钟） 一、配制所需的培养基，按要求灭菌；准备实验材料（需灭菌的要 同时灭菌）。 （80 分钟） 1、仪器：智能集菌仪，智能集菌器（无菌） 2、培养基：
敏学内容及方法 备往 硫乙醇酸盐流体培养基：改良马丁培养基 3、其他： 盛有75%乙醇消青液的玻璃缸、乙醇灯、火柴、75%乙醇棉、碘伏 棉等：镊子、试管、量简、三角瓶、刻度吸管(1、5、1Om、注射器 2、5、1Om)(需灭菌)：无茵衣、裤、帽、口罩（需灭菌）.活化 菌种(45分钟) 1、篱种：金黄色葡萄球菌：(2)枯草芽孢杆菌：(3)大肠埃希篱： (4)铜绿假单胞菌：(S)生孢梭茵：(6)白色念珠菌：()黑曲霉 第三次课(4节，共160分钟) 三、薄膜过滤法方法验证： 为保证检验质量，对所用的检验方法必须经过验证，才能确保检 验结果的准确可罩。当建立药品的无离检查法时，应进行方法的验证， 以确认供试品在该实验条件下无抑菌话牲或其抑菌活性可以忽略不 计。若供试品的生产工艺。原、辅料组分或检验条件发生改变时，检 查方法应进行重新验证。 将规定量的供试品按薄顾过滤法过滤，冲洗，在最后一次的冲洗 液中加入试验菌少于100C下U。取出滤膜接种至相应的培养基中，或 将培养基直接加至滤简内。另取一滤简，不过滤供试品，其它操作同 上，作为阳性对照，将含培养基的容器按规定温度培养3一5天。各 试验菌及相应的培养基逐一进行验证，与阳性对照比较，如含供试品 各客器申的试险菌均生长良好，并且与阳性对照容器内的培养结果相 似，则供试品的该检验量在该检验条件下无抑菌作用或抑菌作用消 除，供试品可按该法进行无菌检查， 四、样品采集与处理： 供试品在移入缓冲间前应豫去外包装、消喜外表面并编号，培养基 管（瓶）用01%新洁尔灭或酒精棉擦拭瓶（管）外壁，然后连同其 他用具（包括无菌衣、帽、口罩等）移人缓冲间，开启操作间紫外灯 和空气过滤装置并使其工作1小时以上
教 学 内 容 及 方 法 备 注 硫乙醇酸盐流体培养基；改良马丁培养基 3、其他： 盛有 75%乙醇消毒液的玻璃缸、乙醇灯、火柴、75%乙醇棉、碘伏 棉等；镊子、试管、量筒、三角瓶、刻度吸管(1、5、lOml)、注射器 (2、5、lOml) （需灭菌）；无菌衣、裤、帽、口罩（需灭菌）、活化 菌种（45 分钟） 1、菌种：金黄色葡萄球菌；(2)枯草芽孢杆菌；(3)大肠埃希菌； (4)铜绿假单胞菌；(5)生孢梭菌；(6)白色念珠菌；(7)黑曲霉 第三次课（4 节，共 160 分钟） 三、薄膜过滤法方法验证： 为保证检验质量，对所用的检验方法必须经过验证，才能确保检 验结果的准确可靠。当建立药品的无菌检查法时，应进行方法的验证， 以确认供试品在该实验条件下无抑菌活牲或其抑菌活性可以忽略不 计。若供试品的生产工艺，原、辅料组分或检验条件发生改变时，检 查方法应进行重新验证。 将规定量的供试品按薄膜过滤法过滤，冲洗，在最后一次的冲洗 液中加入试验菌少于 100CFU。取出滤膜接种至相应的培养基中，或 将培养基直接加至滤筒内。另取一滤筒，不过滤供试品，其它操作同 上，作为阳性对照，将含培养基的容器按规定温度培养 3～5 天。各 试验菌及相应的培养基逐一进行验证。与阳性对照比较，如含供试品 各容器申的试验菌均生长良好，并且与阳性对照容器内的培养结果相 似，则供试品的该检验量在该检验条件下无抑菌作用或抑菌作用消 除，供试品可按该法进行无菌检查。 四、样品采集与处理： 供试品在移入缓冲间前应除去外包装、消毒外表面并编号，培养基 管（瓶）用 0.1%新洁尔灭或酒精棉擦拭瓶（管）外壁，然后连同其 他用具（包括无菌衣、帽、口罩等）移人缓冲间，开启操作间紫外灯 和空气过滤装置并使其工作 1 小时以上
散学内容及方法 备注 操作人员用肥皂、水清洗双手，关闭紫外光灯，进人缓冲间，换 拖鞋，再用75%乙醇棉球擦手，穿戴衣、帽、罩、手套。将所需物品 剥去牛皮纸，移入无菌间，每次试验中所用物品必须计划好，并有备 用物。 将消毒过的安氧针剂先用确酒棉球或碘伏棉球将安蓝外部擦拭 灭菌，特干，用砂轮或灭菌健轻割安瓿颈部（便于折开安甑），再用 75%乙醇棉球将碘酒擦净，待干。用灭菌镊取出注射器，在火焰旁将 针芯插入针管并安上针头，供试品瓶盖和注射器针头均应迅速通过火 焰数次：打开待检样品的铝盖，吸取适量药液加入0.9%无菌氯化钠 溶液至具塞的瓶中。泥匀。 五、无菌检查（薄膜过滤法） 1,取出集菌培养器先检查包装是否完好无损。在无篱室内打开 塑料包装授。 2,将培养器逐个插放在不锈解座上。 3,将集菌培养器的弹性款管装入智能集菌仪泵头，要求定位准 确，软管走势顺畅。 4.打开待检样品的瓶盖插针孔并消毒之，样品瓶定位。 5.拔去进样双芯针管之护套，插入样品瓶中，开启集菌仪，实 施过滤集菌。 6.完成集菌后，若样品含抑菌物质，按药典规范要求适当用冲 洗液清洗。清洗方法与集菌过程相同。 7,消毒培养基瓶插针孔处。 8.摘下顶部空气滤器开口的胶塞，套在培养器底口上，用软管 夹子，依次开闭软管，开启集菌仪，将培养基泵入指定的培养器内， 9,用夹片夹闭与培养器连接部的软管，留下5~6cm软管，舅除 其余部分，并将开日端插在空气过滤器开口上。 10.同时做阳性对照和阴性对照 每次操作时，均应取相应溶剂和稀释剂、及冲洗液同法操作，作
教 学 内 容 及 方 法 备 注 操作人员用肥皂、水清洗双手，关闭紫外光灯，进人缓冲间，换 拖鞋，再用 75%乙醇棉球擦手，穿戴衣、帽、罩、手套。将所需物品 剥去牛皮纸，移入无菌间，每次试验中所用物品必须计划好，并有备 用物。 将消毒过的安瓿针剂先用碘酒棉球或碘伏棉球将安瓿外部擦拭 灭菌，待干，用砂轮或灭菌锉轻割安瓿颈部（便于折开安瓿），再用 75%乙醇棉球将碘酒擦净，待干。用灭菌镊取出注射器，在火焰旁将 针芯插入针管并安上针头，供试品瓶盖和注射器针头均应迅速通过火 焰数次；打开待检样品的铝盖，吸取适量药液加入 0. 9%无菌氯化钠 溶液至具塞的瓶中，混匀。 五、无菌检查（薄膜过滤法） 1．取出集菌培养器先检查包装是否完好无损，在无菌室内打开 塑料包装袋。 2．将培养器逐个插放在不锈钢座上。 3．将集菌培养器的弹性软管装入智能集菌仪泵头，要求定位准 确，软管走势顺畅。 4．打开待检样品的瓶盖插针孔并消毒之，样品瓶定位。 5．拔去进样双芯针管之护套，插入样品瓶中，开启集菌仪，实 施过滤集菌。 6．完成集菌后，若样品含抑菌物质，按药典规范要求适当用冲 洗液清洗，清洗方法与集菌过程相同。 7．消毒培养基瓶插针孔处。 8．摘下顶部空气滤器开口的胶塞，套在培养器底口上，用软管 夹子，依次开闭软管，开启集菌仪，将培养基泵入指定的培养器内。 9．用夹片夹闭与培养器连接部的软管，留下 5～6cm 软管，剪除 其余部分，并将开日端插在空气过滤器开口上。 10.同时做阳性对照和阴性对照 每次操作时，均应取相应溶剂和稀释剂、及冲洗液同法操作，作
敦学内容及方法 备注 为阴性对照。 将已操作完毕的含培养基的集菌培养器移出无菌室，取其中一管 作为阳性对照。依阳性对照菌选择原则加入相应的对照菌液。 11.分别按规定进行培养. 12.观察培养情况，逐日记录。 遂日观察并记录是否长菌，填写检查记录表 如14天后仍不能从外观上判断是否有菌，则可取该培养物接种 于同种新鲜培养基中，继续培养细菌48h,真菌72h),或取菌涂片染 色镜检 第十四天，全班在老师指导下一起观察结果并记录结果。(1节， 40分钟) 结果判定： 1、供试品符合规定： 供试品管均澄清，或虽显浑浊但确证无菌生长 2、供试品不符合规定： 若供试品管中任何一管显浑浊并确证有菌生长 3、试验结果无效： 1)、设备及环境的微生物监控结果不符合无菌检查法的爱求 2)、无菌试验过程中有可能引起微生物污染的因素 3)、阴性对照管有篱生长 4)、供试品管中生长的微生物经整定后，确证是因无菌试验中所 使用的物品或操作技术不当引起的， 六、考核：(10分钟)》 1、根据学生的实验结果、操作规范性、方案设计的合理性进行 综合评价。 2、点评考核情况。 七、实训小结，并布置下次课的实训内容。(5分钟) 课后任务：
教 学 内 容 及 方 法 备 注 为阴性对照。 将已操作完毕的含培养基的集菌培养器移出无菌室，取其中一管 作为阳性对照，依阳性对照菌选择原则加入相应的对照菌液。 11.分别按规定进行培养。 12.观察培养情况，逐日记录。 逐日观察并记录是否长菌，填写检查记录表 如 14 天后仍不能从外观上判断是否有菌，则可取该培养物接种 于同种新鲜培养基中，继续培养(细菌 48h，真菌 72h)，或取菌涂片染 色镜检 第十四天，全班在老师指导下一起观察结果并记录结果。（1 节， 40 分钟） 结果判定： 1、供试品符合规定： 供试品管均澄清，或虽显浑浊但确证无菌生长 2、供试品不符合规定： 若供试品管中任何一管显浑浊并确证有菌生长 3、试验结果无效： 1)、设备及环境的微生物监控结果不符合无菌检查法的要求 2)、无菌试验过程中有可能引起微生物污染的因素 3)、阴性对照管有菌生长 4)、供试品管中生长的微生物经鉴定后，确证是因无菌试验中所 使用的物品或操作技术不当引起的。 六、考核： （10 分钟） 1、根据学生的实验结果、操作规范性、方案设计的合理性进行 综合评价。 2、点评考核情况。 七、实训小结，并布置下次课的实训内容。（5 分钟） 课后任务：
教学内容及方法 备往 完成检验报告单的填写 下次课实训任务： 综合实训项目三：氨基酸口服液的微生物限度检查（细菌菌落计 数、霉离菌落计数、大肠杆菌检查)
教 学 内 容 及 方 法 备 注 完成检验报告单的填写 下次课实训任务： 综合实训项目三：氨基酸口服液的微生物限度检查（细菌菌落计 数、霉菌菌落计数、大肠杆菌检查）