重庆医药高等专科学校教案（首页） 课程 综合实训项口十 《药品生物检定技术》 单元（章） 四 课恩：综合实训项目十三5%葡萄精注射液的细阕内蒋素榄 学时 8 散学资源：《药品生物检定技术》李检彬主编，化学工业出版社，W家规划教材 散学类型：实验技能训练 教学方法 直观教学法、情境教学法、案例教学法、角色转换教学法、启发引宁数学法 专业班次 授课日期 知识与能力要求！ 1.学习细茵内毒素检查法的基本原理和方法。 2,罩挥细肉内毒素检在法（深胶法）的有关操作。 重难点： 重点：细随内毒素检查法的基木原理利方法 难点：细南内毒煮检查法〔凝胶法》的有关操作。 课后记： 任课老师： 年月日 教研室主任 年月日
重庆医药高等专科学校教案（首页） 课程 《药品生物检定技术》 单元（章） 综合实训项目十 四 课题：综合实训项目十三 5%葡萄糖注射液的细菌内毒素检 查 学时 8 教学资源：《药品生物检定技术》李榆梅主编，化学工业出版社，国家规划教材 教学类型： 实验技能训练 教学方法： 直观教学法、情境教学法、案例教学法、角色转换教学法、启发引导教学法 专业班次 授课日期 知识与能力要求： 1．学习细菌内毒素检查法的基本原理和方法。 2．掌握细菌内毒素检查法（凝胶法）的有关操作。 重难点： 重点：细菌内毒素检查法的基本原理和方法。 难点：细菌内毒素检查法（凝胶法）的有关操作。 课后记： 任课老师 ： 年 月 日 教研室主任: 年 月 日
教学内客及方法 备在 综合实训项目十三5%葡萄糖注射液的细菌内毒素检查 致学设计： 第1次课 一、准备知识教学 一) 1。热原与圳菌内毒素的概念， 2,热原检查法（家兔开温法）。 3。知苗内毒素检查法：凝胶法利光度测定法 (二) L.疑胶法反应原理 鲨试剂反应凉理蜜的血变形知胞中含有两种物质，即高分子量 凝固酶原和凝固蛋白原。前者经内毒素激化转化成为具有活性的凝固 碑，通过凝固碑的醇解作用将凝固蛋白原转变为凝固蛋白，凝固蛋白 又进过必联酶作用互相聚合而形成牛的凝粒。 2.试验前准备 3.柔收法操作过程 4.影散法结果判断 二，安排检验方案设计 (一)操作流程 凝胶法操作流程主要包活： 1,确定检品的L值 L=K/M 式中，L为供试品的细菌内诗素限值，一般以EUml、EU血g或 EUU(活性单位)表示：K为人每千克体重每小时最大可接受的内青 囊剂澈，以U/(kgh)表示，注射剂R=51U/(kgh》,放射性药品 注射剂K=2.5EU(kgh),精内用注射剂K=0.2EU/(kgh):M为 人用每千克体重每小时的最大供试品剂量，以ml/(kgh人、g(kgh) 或U/(kgh)表示，人均体日按60kg计算，人体表面积按l.62m产计
教 学 内 容 及 方 法 备 注 综合实训项目十三 5%葡萄糖注射液的细菌内毒素检查 教学设计： 第 1 次课 一、准备知识教学 （一） 1．热原与细菌内毒素的概念。 2．热原检查法（家兔升温法）。 3．细菌内毒素检查法：凝胶法和光度测定法。 （二） 1. 凝胶法反应原理 鲎试剂反应原理 鲎的血变形细胞中含有两种物质，即高分子量 凝固酶原和凝固蛋白原。前者经内毒素激化转化成为具有活性的凝固 酶，通过凝固酶的酶解作用将凝固蛋白原转变为凝固蛋白，凝固蛋白 又通过交联酶作用互相聚合而形成牢固的凝胶。 2. 试验前准备 3. 凝胶法操作过程 4. 凝胶法结果判断 二、安排检验方案设计 （一）操作流程 凝胶法操作流程主要包括： 1．确定检品的 L 值 L＝K/M 式中，L 为供试品的细菌内毒素限值，一般以 EU/ml、EU/mg 或 EU/U（活性单位）表示；K 为人每千克体重每小时最大可接受的内毒 素剂量，以 EU/（kg·h）表示，注射剂 K＝5EU/（kg·h），放射性药品 注射剂 K＝2.5EU/（kg· h），鞘内用注射剂 K＝0.2EU/（kg·h）；M 为 人用每千克体重每小时的最大供试品剂量，以 ml/（kg·h）、mg/（kg·h） 或 U/（kg·h）表示，人均体重按 60kg 计算，人体表面积按 1.62m2 计
散学内容及方法 备注 算。注时时间若不足1小时，按1小时计算。供试品每平方米体表面 积剂量乘以0.027即可转换为每千克体重剂量(MD. 2,计算检品的MD MVD=cL 式中，L为供试品的细满内毒素限值：℃为供试品溶液的浓度， 当L以EU/ml表示时，则e等于1.0mlml,当L以EU/mg或EUU 表示时，c的单位需为mgml或Uml。如供试品为注射用无菌粉末或 原料药，则MD取1，可计算供试品的最小有效稀释浓度©=L:A 为在凝胶法中餐试剂的标示灵敏度(EUm),或是在光度测定法中所 使用的标准曲线上最低的内毒素浓度。 1和D需要经过预试验验证， 3,操作方法 (1)取内毒素工作标准品」支，用砂轮片制断安氧瓶上段，准 确加入BET水1ml复溶，用封口膜封闭，旋涡混合器上混合15分钟， 将混合好的内毒素溶液加水稀释成2以浓度的内毒素溶液。 (2)取5%葡萄糖注射液1ml,稀释为SvD: (3)取鲎试剂8支，放入试管架中，如下表标记并加液，每组 平行两支。 S 供试品阳性对画 阳性对照 阴性无 l+0.1ml SsrvD 0.1ml SMVD+0.1ml Ezz 0.1ml+0.1ml Ezx 0.2ml (4)封闭管口，摇匀，放入37℃±1℃恒温水浴保温60分钟壮2 分钟，取出观察结果，记录结果。 将试管缓慢翻转180°，若管内凝胶显示坚实不变形为阳性，记录 为“+”：若无凝胶出现，或虽有凝胶但不能保持完整。从管瘗滑脱， 均判定为阴性，记录为“一”。 4,结果判断若阴性对服溶液的平行管均为阴性，供试品阳性 对照溶液的平行管均为阳性，阳性对照溶液的平行管均为阳性，试验 有效。若检品S的两个平行管均为阴性，判定供试品符合规定：若检
教 学 内 容 及 方 法 备 注 算。注射时间若不足 1 小时，按 1 小时计算。供试品每平方米体表面 积剂量乘以 0.027 即可转换为每千克体重剂量（M）。 2．计算检品的 MVD MVD＝cL/λ 式中，L 为供试品的细菌内毒素限值；c 为供试品溶液的浓度， 当 L 以 EU/ml 表示时，则 c 等于 1.0ml/ml，当 L 以 EU/mg 或 EU/U 表示时，c 的单位需为 mg/ml 或 U/ml。如供试品为注射用无菌粉末或 原料药，则 MVD 取 1，可计算供试品的最小有效稀释浓度 c＝λ/L；λ 为在凝胶法中鲎试剂的标示灵敏度（EU/ml），或是在光度测定法中所 使用的标准曲线上最低的内毒素浓度。 λ 和 MVD 需要经过预试验验证。 3．操作方法 （1）取内毒素工作标准品 1 支，用砂轮片割断安瓿瓶上段，准 确加入 BET 水 1ml 复溶，用封口膜封闭。旋涡混合器上混合 15 分钟。 将混合好的内毒素溶液加水稀释成 2λ 浓度的内毒素溶液。 （2）取 5%葡萄糖注射液 1ml，稀释为 SMVD。 （3）取鲎试剂 8 支，放入试管架中，如下表标记并加液，每组 平行两支。 S 供试品阳性对照 阳性对照 阴性对照 0.1ml 水+0.1ml SMVD 0.1ml SMVD+0.1ml E2λ 0.1ml 水+0.1ml E2λ 0.2ml 水 （4）封闭管口，摇匀，放入 37℃±1℃恒温水浴保温 60 分钟±2 分钟，取出观察结果，记录结果。 将试管缓慢翻转 180°，若管内凝胶显示坚实不变形为阳性，记录 为“+”；若无凝胶出现，或虽有凝胶但不能保持完整，从管壁滑脱， 均判定为阴性，记录为“－”。 4．结果判断 若阴性对照溶液的平行管均为阴性，供试品阳性 对照溶液的平行管均为阳性，阳性对照溶液的平行管均为阳性，试验 有效。若检品 S 的两个平行管均为阴性，判定供试品符合规定；若检
敦学内容及方法 备注 品S的两个平行管均为阳性，判定供试品不符合规定：若检品S的两 个平行管中的一管为阳性，另一管为阴性，需进行复试。 三、学生分组做实验前准备。（课外时间） 任务：%葡萄糖注射液的细菌内毒素检查 要求：学生分组，利用课外时间查找相关资料，主要是2010年 版《中国药典》及《中国药品检验标准操作规范》，确定检验程序， 设计详细的检验方案。老师审核修政每组学生的检验方案。 四、学生分组做实验前准备。（课外时间》 第2次课 一、学生观看标准操作录像。 二、老师发放5%葡萄糖注射液，学生在老师指导下完成样品处理、 供试液制备操作。 三、学生分组完成操作，进行加样。 四、学生在老师指导下完成保温工作。 五、随机抽一名学生演示上述操作，由同学们充当评委，指出操作不 当之处。 六、根据中国药典。对检验结果进行判断。 七、老师组织组间评比，评比内容包括方案设计的合理性、操作的规 范性、报告方法及检验结果的准确性等，由同学代表和老师共同综合 上述各项打分。 四、知识梳理： 1、热原和细菌内毒素的概念及美系。 2、凝胶法测定细篱内毒素的原理。 3、凝胶法的测定方法。 4、报告处理方法。 课后任务： 1、完成检验报告。 2、旋祸混合器的作用是什么？
教 学 内 容 及 方 法 备 注 品 S 的两个平行管均为阳性，判定供试品不符合规定；若检品 S 的两 个平行管中的一管为阳性，另一管为阴性，需进行复试。 三、学生分组做实验前准备。（课外时间） 任务：5%葡萄糖注射液的细菌内毒素检查 要求：学生分组，利用课外时间查找相关资料，主要是 2010 年 版《中国药典》及《中国药品检验标准操作规范》，确定检验程序， 设计详细的检验方案。老师审核修改每组学生的检验方案。 四、学生分组做实验前准备。（课外时间） 第 2 次课 一、学生观看标准操作录像。 二、老师发放 5%葡萄糖注射液，学生在老师指导下完成样品处理、 供试液制备操作。 三、学生分组完成操作，进行加样。 四、学生在老师指导下完成保温工作。 五、随机抽一名学生演示上述操作，由同学们充当评委，指出操作不 当之处。 六、根据中国药典，对检验结果进行判断。 七、老师组织组间评比，评比内容包括方案设计的合理性、操作的规 范性、报告方法及检验结果的准确性等，由同学代表和老师共同综合 上述各项打分。 四、知识梳理： 1、热原和细菌内毒素的概念及关系。 2、凝胶法测定细菌内毒素的原理。 3、凝胶法的测定方法。 4、报告处理方法。 课后任务： 1、完成检验报告。 2、旋涡混合器的作用是什么？
教学内容及方法 备往 3、设置阳性对照、阴性对照的意义分别是什么？
教 学 内 容 及 方 法 备 注 3、设置阳性对照、阴性对照的意义分别是什么？