广东轻工职业技术学院标准乳及乳制品中三聚氰胺的测定.pdf_大学文库

DB13/T1000-2008 乳及乳制品中三聚氰胺的测定 1范围本标准规定了乳及乳制品中三聚氯胺的测定方法。本标准适川于乳及乳制昌中三聚氯酸的测定，本标准中高效液相色游法定量检出限为20mgg高效液相色带-串联质游法定量检出限为0.01 mgkg:气相色进-质谱法定量检出限为0.05mgkg 2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用面成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修政单（不包括肠误的内容）暖修订板均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6682一2008分析实验室用水规格和试验方法 3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。 3.1 乳制品是指以生鲜牛（羊）乳及其制品为主要原料，经加工而制成的各种食品。本标准所指的乳制品包括液体乳类《杀南乳、灭南乳、酸牛乳、配方乳)，乳粉类《全脂乳粉、晚酯乳粉、全酯加糖乳粉和调味乳粉，婴幼儿乳粉、其他配方乳粉)，含乳饮料类、炼乳类（全霜无糖炼乳、全脂加糖炼乳、调味炼乳：配方炼乳)，乳脂防类（稀奶油、奶油、无水奶油），干酪秀（原干留：再制干酷），乳冰淇淋类（乳冰淇淋、乳冰)和其他乳材品类（干格素、乳糖、乳清粉、浓第乳清蛋白》等。第一法高效液相色谱法 4原理试样经溶解、超声提取、淀蛋白、过滤得到测试液，经高效液相色语测定，根据保留时间和紫外吸收光请定性，根据峰面积进行定量。 5试剂方法中所用试剂，障另有规定外，均为分析礼试剂，水为G讯/T6682-2008中一级用水，溶液为水溶液。 5.1碳基水杨酸。 5,2柠檬酸。 5.3辛烷情酸钠：高效液相色游离子对试剂。 5.4乙睛：色语纯。 5,5盐酸。 5.660gL磺基水桥酸：称取60g磺基水畅酸用水定容至1L: 2 食品伙伴网http://w,foodnate..net

DB13/T 1000—2008 2 乳及乳制品中三聚氰胺的测定 1 范围本标准规定了乳及乳制品中三聚氰胺的测定方法。本标准适用于乳及乳制品中三聚氰胺的测定。本标准中高效液相色谱法定量检出限为 2.0 mg/kg；高效液相色谱-串联质谱法定量检出限为 0.01 mg/kg；气相色谱-质谱法定量检出限为 0.05 mg/kg。 2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T 6682—2008 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。 3.1 乳制品是指以生鲜牛（羊）乳及其制品为主要原料，经加工而制成的各种食品。本标准所指的乳制品包括液体乳类（杀菌乳、灭菌乳、酸牛乳、配方乳）、乳粉类（全脂乳粉、脱脂乳粉、全脂加糖乳粉和调味乳粉、婴幼儿乳粉、其他配方乳粉）、含乳饮料类、炼乳类（全脂无糖炼乳、全脂加糖炼乳、调味炼乳；配方炼乳）、乳脂肪类（稀奶油、奶油、无水奶油）、干酪类（原干酪；再制干酪）、乳冰淇淋类（乳冰淇淋、乳冰）和其他乳制品类（干酪素、乳糖、乳清粉、浓缩乳清蛋白）等。第一法高效液相色谱法 4 原理试样经溶解、超声提取、沉淀蛋白、过滤得到测试液，经高效液相色谱测定，根据保留时间和紫外吸收光谱定性，根据峰面积进行定量。 5 试剂方法中所用试剂，除另有规定外，均为分析纯试剂，水为GB/T 6682-2008中一级用水，溶液为水溶液。 5.1 磺基水杨酸。 5.2 柠檬酸。 5.3 辛烷磺酸钠：高效液相色谱离子对试剂。 5.4 乙腈：色谱纯。 5.5 盐酸。 5.6 60 g/L 磺基水杨酸：称取 60 g 磺基水杨酸用水定容至 1 L。食品伙伴网http://www.foodmate.net

DB13/T 1000—2008 3 5.7 0.1 mol/L 盐酸：量取 8.3 mL 盐酸用水稀释至 1 L。 5.8 缓冲液：柠檬酸和辛烷磺酸钠浓度均为 10 mmol/L。 5.9 三聚氰胺标准品：已知含量大于 99%。 5.10 标准储备液：称取三聚氰胺标准品 0.01g（准确至 0.0 001g），用甲醇配制成浓度为 1 mg/mL 标准储备液。 5.11 标准系列：将标准储备液用 0.1 mol/L 盐酸逐级稀释至 0.25µg/mL，0.50µg/mL，1.00 µg/mL， 2.00 µg/mL，4.00 µg/mL，5.00 µg/mL，10.0 µg/mL 的系列标准溶液。 6 仪器 6.1 高效液相色谱，附二极管阵列检测器或紫外检测器。 6.2 天平：感量0.01 g。 6.3 分析天平：感量0.0 001 g。 6.4 高速离心机：转速>4 000 r/min。 6.5 超声波清洗器。 6.6 旋涡混匀器。 7 样品处理 7.1 固态乳制品称取 1.0 g 左右试样（准确至 0.0 001 g），加入 0.1 mol/L 盐酸约 15 mL，涡旋混匀，超声提取 30 min 后加入 60 g/L 磺基水杨酸 6 mL ~8 mL，用 0.1 mol/L 盐酸定容至 25 mL，混匀后离心，上清液经 0.45 µm 的微孔滤膜过滤后进样。 7.2 液态乳制品（包含酸奶）称取 15 g 左右试样（准确至 0.0 001 g），加入 60 g/L 磺基水杨酸 3 mL~4 mL，用 0.1 mol/L 盐酸定容至 25 mL，混匀后离心，上清液经 0.45 µm 的微孔滤膜过滤后进样。 8 测定步骤 8.1 色谱条件 8.1.1 色谱柱：ODS C8，250 mm×4.6 mm，5 µm。 8.1.2 流动相：缓冲液︰乙腈=85︰15。 8.1.3 流速：1.0 mL/min。 8.1.4 柱温：40 ℃。 8.1.5 波长：240 nm。上述色谱条件是典型的，可根据实际情况做具体调整。 8.2 测定 8.2.1 标准曲线制备将标准系列 0.25µg/mL，0.50µg/mL，1.00 µg/mL，2.00 µg/mL，4.00 µg/mL，5.00 µg/mL，10.0 µg/mL 分别进样 20 µL,以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标作图，制作标准曲线。 8.2.2 样品测定取制备好的试样溶液进样 20 µL,进行液相色谱分析。根据保留时间和紫外吸收光谱定性，根据峰面积进行定量。三聚氰胺的标准色谱图和光谱图见图 1 和图 2。食品伙伴网http://www.foodmate.net

DB13/T1000-2008 11.2乙晴：色请纯. 11.3盐酸：优级纯. 11,4甲酸拨：优级纯。 11.51mcL盐酸水溶液：量取90L盐酸，加水至1000mL. 11.80.02olM甲酸像水溶液：pH-5.0. 11.7氢水甲醇溶液：量取5mL氨水溶解至100mL甲醇中。 11.8三聚氟按标准品：已知含量399%. 11,9三聚氰威标淮贮备液，准确称量100g(精确至01g》的三聚氟按标准品，用乙睛水溶液(7 :3)溶解定容于100mL容量瓶，。该溶液浓度为1000gmL。 11.10三聚氯按标准工作液：分别准确量取三聚氟按标准贮备液(11.9)1.0mL.和10.0ml于100mL 容量瓶中。用乙睛水溶液(2：8)定溶至刻度。该标准工作液沫度分别为10emL和100mL。现用现配. 12佼圈 12.1高煮液相色谱-申联质谱仪：配有电喷雾离子源(ES), 12.2天平，感量0.01g 12.3分析天平：够量0.00001g. 12.4高速低温离心机(15000min). 12.5超声波振荡仪。 12.6旋涡混匀器： 12.7氨吹仪。 12.8风相草取装置。 12.90 asis MCXI固相萃取柱：150mg/6mL,或相当者， 13样品处理 13.1提取岁潭 13.1.1因态乳制品准确称取样品2g(精确至Q01g)于50mL具寒刻度离心管中，分别加入25ml乙睛：水(60：40) 混合提取液和们mL盐酸溶液(11.5)，提取液定容至刻度，超声提取20min,10000min低温离心5min, 上清液特净化。 13.1.2液态乳制品准确称取样品10g(精确至0.01g》于50mL具寒刻度离心管中，分别加入25mL乙睛提取液和1ml 盐酸溶液(11,5)，提数液定容至刻度。超声提数20min,10000mim低温离心5mn:上清液特净化。 13.1.3酸奶准确称取样品10g(精确至001g)于0mL具塞刻度离心管中，分别加入25ml乙睛：水(80 20)混合提取液和1mL盐酸溶液(11.5)，提取液定容至刻度，超声提取20min,10000min低盟离心5min,上清液待净化 13.2净化依次加入3mL甲醇、3mL水活化固相举取柱，准确移取10.0mL上清液(13.1)过固相举取柱，控制过柱速度在1mmn以内。再依次加入3ml水和3ml甲醇淋流倒相萃取柱，抽近干，用8mL氨水甲醇溶液(11.7)洗眼，收集洗殿液于50℃氮气吹干。用20%乙睛水溶液1.0mL溶解残渣，激锅混匀1min,10000min低温离心5mm,上清液过022m滤膜，供高效液相色游-串联质谱法测定。 13.3空白添加标准由线的制备 5 食品伙伴网http://w,foodnate.net

DB13/T 1000—2008 5 加水至1 000 mL。 00 mL甲醇中。的三聚氰胺标准品，用乙腈水溶液（7 ，用乙腈水溶液（2︰8）定溶至刻度，该标准工作液浓度分别为10 μg/mL和100 μg/mL，现用现配。仪：配有电喷雾离子源（ESI）。 15 000 r/min）。。 12.9 Oasis MCX固相萃取柱：150 mg/6 mL，或相当者。 13 样品处理 13.1 盐酸溶液（11.5），提取液定容至刻度，超声提取20 min，10 000 r/min低温离心5 min， 13.1 液（11.5），提取液定容至刻度，超声提取20 min，10 000 r/min低温离心5 min，上清液待净液（11.5），提取液定容至刻度，超声提取20 min，10 000 r/min低温清液待净化。 13.2 min，上清液过0.22 μm滤膜，供高效液相色谱-串联质谱法测定。线的制备 11.2 乙腈：色谱纯。 11.3 盐酸：优级纯。 11.4 甲酸铵：优级纯。 11.5 1 mol/L盐酸水溶液：量取90 mL盐酸， 11.6 0.02 mol/L甲酸铵水溶液：pH=5.0。 11.7 氨水甲醇溶液：量取5 mL氨水溶解至1 11.8 三聚氰胺标准品：已知含量≥99％。 11.9 三聚氰胺标准贮备液：准确称量100 mg(精确至0.1 mg) ︰3）溶解定容于100 mL容量瓶，该溶液浓度为1 000μg/mL。 11.10 三聚氰胺标准工作液：分别准确量取三聚氰胺标准贮备液（11.9）1.0 mL和10.0 mL于100 mL 容量瓶中 12 仪器 12.1 高效液相色谱-串联质谱 12.2 天平：感量0.01 g。 12.3 分析天平：感量0.00 001 g。 12.4 高速低温离心机（ 12.5 超声波振荡仪。 12.6 旋涡混匀器 12.7 氮吹仪。 12.8 固相萃取装置。 13.1 提取步骤 .1 固态乳制品准确称取样品2 g（精确至0.01 g）于50 mL具塞刻度离心管中，分别加入25 mL乙腈︰水（60︰40）混合提取液和1 mL 上清液待净化。 .2 液态乳制品准确称取样品10 g（精确至0.01 g）于50 mL具塞刻度离心管中，分别加入25 mL乙腈提取液和1 ml 盐酸溶化。 13.1.3 酸奶准确称取样品10 g（精确至0.01 g）于50 mL具塞刻度离心管中，分别加入25 mL乙腈︰水（80︰ 20）混合提取液和1 mL盐酸溶离心5 min，上净化依次加入3 mL甲醇、3 mL水活化固相萃取柱，准确移取10.0 mL上清液（13.1）过固相萃取柱，控制过柱速度在1 mL/min以内。再依次加入3 mL水和3 mL甲醇淋洗固相萃取柱，抽近干，用8 mL氨水甲醇溶液（11.7）洗脱，收集洗脱液于50℃氮气吹干，用20％乙腈水溶液1.0 mL溶解残渣，漩涡混匀1 min，10 000r/min低温离心5 13.3 空白添加标准曲食品伙伴网http://www.foodmate.net

DB13/T1000-2008 13.3.1因态乳制品分别准确量取10.0gmL三聚氰胺标准工作液(11.10)适量，添如到2.0g(精确至0.01g)室白试样中，制阁浓度为0.50mgkg、2.00mgkg、500mgkg、&00mgkg.10.00mgkg的各系列空白漆加试样，按13,1一13,2步骤操作，供高效液相色语-串联质谱测定。制作标准曲线。 13.3.2液态乳制品和酸奶分别准确量家100.0gmL三紧氰胶标准工作液(11.10)适量，添加到10g(精确至0.01)空白试样中，制得沫度为0,50mgkg、2.00mgkg、500mgkg、8.00mgkg、10,00mgkg的各系列室白添加试样，按13.1一13.2岁骤操作，供高效液相色谱-串联质谱测定，制作标准曲线。 14测定步骤 14.1色进条件 14,1.1色谱柱：ypersil S0:硅胶色请柱。250mm×4.6mm,5m,或相当者. 141.2流动相：A相：乙睛，B相：甲酸筏水济液(5.6)。梯度洗殿条件见用录A. 14.1.3流速：0.8 ml/min. 14.1.4柱温：40℃。 14.1.5进样量：10ul. 14,2质罐条件 14.2.1定量离子对为12785，曜撞池电压为20V。 14.2.2定性离子对为127/68，碰撩池电压为35V. 14.2.3其他条件见附录B. 14.3测定 14.3.1测定法取试样溶液和相应的空白添加标准溶液，单点校准，外标法计算，即得。以峰面积凯分值定量，空白漆加标准溶液及试样溶液中三聚氰按的响应值均应在仪器检测的线性范圆之内，在上述色滞条件下，空白添加杯准溶液和试样第液中的特征离子的质量色讲图见附泉C。 14.3.2定性与定量 14.321定性通过样品色讲图的保留时间与标准品的保喻时问、各色游峰的特征离子与相应浓度标流品各色谱峰的特征离子相对照定性，样品与标准品的保断时间的相对偏差不大于5⅓：样品特征离子的相对丰度与浓度相当混合标准溶液的相对丰度一吸，定性测定封相对离子市度的最大允许偏差不超过10帆，同时满足以上两个条件则可列断样品中存在相应的棱测物。 14.322定量将供试试样和标准溶液的定量离子面机之比作单点校正， 15结果计算 15.1计算试样中三聚氰胺的含量(mgkg)按式(2)计算： X=AxC:xV A关用式中： X一试样中三聚制按的含量，mg/k A一试样溶液中三聚氯胺的峰面积：食品伙伴http:/w.foodnate.net

DB13/T 1000—2008 6 13.3 的各系列空骤操作，供高效液相色谱-串联质谱测定，制作标准曲线。 13.3 的各系列空添加试样，按13.1～13.2步骤操作，供高效液相色谱-串联质谱测定，制作标准曲线。梯度洗脱条件见附录A。 in。 10 µL。 8, 碰撞池电压为35 V。条件见附录B。 14.3 范围之内，在上述色谱条件下，样溶液中的特征离子的质量色谱图见附录C。量 14.3 离子丰度的最大允许偏差不超过±10%，同时则可判断样品中存在相应的被测物。 14.3 将供试试样和标准溶液的定量离子面积之比作单点校正。 15 结果计算 15.1 试样中三聚氰胺的含量（mg/kg）按式（2）计算: .1 固态乳制品分别准确量取10.0 μg/mL三聚氰胺标准工作液（11.10）适量，添加到2.0 g（精确至0.01 g）空白试样中，制得浓度为0.50 mg/kg、2.00 mg/kg、5.00 mg/kg、8.00 mg/kg、10.00 mg/kg 白添加试样，按13.1～13.2步 .2 液态乳制品和酸奶分别准确量取100.0 μg/mL三聚氰胺标准工作液（11.10）适量，添加到10 g（精确至0.01 g）空白试样中，制得浓度为0.50 mg/kg、2.00 mg/kg、5.00 mg/kg、8.00 mg/kg、10.00 mg/kg 白 14 测定步骤 14.1 色谱条件 14.1.1 色谱柱：Hypersil SiO2 硅胶色谱柱，250 mm×4.6 mm，5 μm，或相当者。 14.1.2 流动相：A相:乙腈，B相:甲酸铵水溶液（5.6）。 14.1.3 流速：0.8 mL/m 14.1.4 柱温：40℃。 14.1.5 进样量： 14.2 质谱条件 14.2.1 定量离子对为 127 /85, 碰撞池电压为 20 V。 14.2.2 定性离子对为 127 /6 14.2.3 其他 14.3 测定 .1 测定法取试样溶液和相应的空白添加标准溶液，单点校准，外标法计算，即得。以峰面积积分值定量，空白添加标准溶液及试样溶液中三聚氰胺的响应值均应在仪器检测的线性空白添加标准溶液和试 14.3.2 定性与定 .2.1 定性通过样品色谱图的保留时间与标准品的保留时间、各色谱峰的特征离子与相应浓度标准品各色谱峰的特征离子相对照定性。样品与标准品的保留时间的相对偏差不大于5％；样品特征离子的相对丰度与浓度相当混合标准溶液的相对丰度一致，定性测定时相对满足以上两个条件 .2.2 定量计算 S ×mA VCA X × S × = ………………………….…….…………(2) 式中： X—试样中三聚氰胺的含量，mg/kg； A—试样溶液中三聚氰胺的峰面积；食品伙伴网http://www.foodmate.net

DB13/T1000-2008 A,一标准工作液中三聚氟胶的峰面积： C,一标准工作液中三聚氰胺的浓度，mg1: V一试样定容体积，mL: m一样品质量，8：平行测定结果用算术平均值表示，结果保留三位有效数字。 15.2精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的施对差值不得超过算术平均值的20%，第三法气相色谱一质谱法 16原理试样经三氯乙酸短声提取，SPE小柱净化后，进行硅烷化面生，行生产物采用选择离子监测(SM) 的质请扫描模式进行定性定量分析。 17试剂方法中所用试剂，除另外说明外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682-2008规定的一级水. 17.1行生化试剂：N,O-双三甲基硅基三氟乙酰胺(BSTFA)十1%三甲基氯硅烷(TMCS), 17.2吡定：优级纯。 17.3甲醇：色请纯， 17.4甲醇溶液(1：4)：200mL.甲醇(17.3)加入800mL一级水，混匀. 17.5氮水 17.6三氯乙酸溶液：质量分数为1%的水溶液（现用现配）。 17.7甲醇氨水溶液：100mL甲醇中加入5mL氨水. 17,8三聚氟孩标准品：己知含量多99%， 17.9三聚氟胶标准储备液：准确称取三聚家陵标准品0.1000g于100mL的容量框中，用甲醇(17.4) 溶解并定容至刻度。此溶液浓度为1mgmL,于4℃冰箱内储存，有效期3个月， 17.10三聚氰胺标准中间液：吸取标准错备液(17.9)5.0mL于50mL客量原中，用甲醇(17.4) 定容至刻度，此溶液浓度为100gmL,于4℃冰箱内储存，有效期1个月. 17.11三聚氯按标准工作液：移取标准中阿液(17.10)1ml、5ml,10ml、25mL、50ml于5个 100mL容量瓶内，用甲醇溶液(17.4)定容至刻度，北溶液浓度为1.0gmL、5.0gmL.10.0emL, 25.0ugmL、50.0ugmL,于4℃冰箱内储存，有效期1周. 18佼器 18.1气相色谱质谱联用仪：配有正离子源（日）： 18.2澈阀振落墨。 18.3超声报荡器. 18.4滤膜：孔径0.454m 18.5离心机：15000rmin. 18.8氯吹仪：可控温度至60℃， 18.7图相萃取装置：固相萃取柱Oasis MCX柱，150厚/6mL,成相当者， 19样品处理 19.1提取步潭食品伙伴网http://ww.foodnate.net

DB13/T 1000—2008 7 的浓度，mg/L；；果用算术平均值表示，结果保留三位有效数字。 15.2 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20％。第三法气相色谱-质谱法 16 原理柱净化后，进行硅烷化衍生，衍生产物采用选择离子监测（SIM） 17 试剂。 O-双三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA）＋1％三甲基氯硅烷（TMCS）。液（1︰4）：200 mL 甲醇（17.3）加入 800 mL 一级水，混匀。）。 mL 氨水。中，用甲醇（17.4）瓶中，用甲醇（17.4） 1.0 μg/mL、5.0 μg/mL、10.0 μg/mL、 25.0 μg/mL、50.0 μg/mL，于 4℃冰箱内储存，有效期 1 周。用仪：配有正离子源（EI）。 Oasis MCX 柱：150 mg/6 mL，或相当者。 19 样品处理 AS—标准工作液中三聚氰胺的峰面积； CS—标准工作液中三聚氰胺 V—试样定容体积，mL m—样品质量，g。平行测定结精密度试样经三氯乙酸超声提取、SPE 小的质谱扫描模式进行定性定量分析。方法中所用试剂，除另外说明外，所有试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682-2008 规定的一级水 17.1 衍生化试剂：N， 17.2 吡啶：优级纯。 17.3 甲醇：色谱纯。 17.4 甲醇溶 17.5 氨水 17.6 三氯乙酸溶液：质量分数为 1％的水溶液（现用现配 17.7 甲醇氨水溶液：100 mL 甲醇中加入 5 17.8 三聚氰胺标准品：已知含量≥99％。 17.9 三聚氰胺标准储备液：准确称取三聚氰胺标准品 0.1 000 g 于 100 mL 的容量瓶溶解并定容至刻度。此溶液浓度为 1 mg/mL，于 4℃冰箱内储存，有效期 3 个月。 17.10 三聚氰胺标准中间液：吸取标准储备液（17.9）5.0 mL 于 50 mL 容量定容至刻度，此溶液浓度为 100 μg/mL, 于 4℃冰箱内储存，有效期 1 个月。 17.11 三聚氰胺标准工作液：移取标准中间液(17.10)1 mL、5 mL、10 mL、25 mL、50 mL 于5个 100 mL 容量瓶内，用甲醇溶液（17.4）定容至刻度，此溶液浓度为 18 仪器 18.1 气相色谱质谱联 18.2 漩涡振荡器。 18.3 超声振荡器。 18.4 滤膜：孔径 0.45 μm。 18.5 离心机：15 000 r/min。 18.6 氮吹仪：可控温度至 60℃。 18.7 固相萃取装置：固相萃取柱 19.1 提取步骤食品伙伴网http://www.foodmate.net

DB13/T1000-2008 19.1.1固态乳制品试样充分混匀，称取2g(精确至0.01g)样品于50mL具塞比色管，加入25mL1%三氧乙酸溶液，激洞振落30s,超声提取30min,10000/mn离心5mim,用1%三氯乙酸定容至射度。充分混匀后，静置，过滤，滋液待净化。 19.1.2液态乳制品及酸奶称取10g(精确至0,01g样品于50mL具塞比色管，加入25mL1%三美乙酸溶液。藏涡振荡30s: 超声提取30min,10000min离心5min,用1%三氧乙酸定容至刻度。充分混匀后，静置，过滤，滤液特净化。 19.2净化依次加入3m山甲醇、3mL水活化固相萃取柱，准确移取适当体积数的特净化滤液上固相革取柱，控制过柱速度在1mLmn以内，再依次加入3mL水和3mL甲醇淋洗固相萃取柱，袖近干，用3mL甲醇氨水溶液洗脱。收集洗脱液于50℃氢气吹干，根据洗脱液中三聚氯胺的浓度用甲醇溶液(17.)进行适当稀释。问时三聚氯酸标准系列同步净化。 19.3衍生化准确移取一定量沈脱液。用氯气吹干，加入400的北定和200L衍生化试剂，混匀，70℃反应 30mn,月时三聚氯胺标准系列月步行生， 20测定步骤 20.1质灌条件 20.1.1传输线温度：280℃. 20.1.2扫描意围：60mz一400m2. 20.1.3扫捕模式：选择离子扫描。监测离子m:99、171、327、342. 20.1.4离子源温度：230℃. 20.1.5日l源表击能：70Ev. 20.1.6色谱条件见附求D. 20.2测定 20.2.1工作由线的绘制吸取系列标准工作液各1L注入气相色谱质语联用仪中，单点校准。按外标法，以饰面积积分值定量，绘制工作曲线。 20.2.2定性与定量 20.221定性通过样品色讲图的保留时间与标准品的保留时间，各色游峰的特征离子与相应浓度标准品色游峰的特征离子相对凰定性。试样与标准晶保留时闻的相对偏差不大于5%，转征离子的相对丰度与标准溶液的相对丰度一致，相对离子卡度的最大允许偏差不超过0%。三聚氰胺标准图情见附录E。 20.2.22定量采用外标法以定量离子(m吃327)峰面积进行定量。 21结果计算 21.1计算试样中三聚部胺含量(gkg》按式(3)计算 :CxVxF 闭 …(3) 式中： 8 食品伙伴网http://w,foodnate..net

DB13/T 1000—2008 8 19.1 n，10 000 r/min离心5 min，用1％三氯乙酸定容至刻度。充分混匀后， 19.1 n，10 000 r/min离心5 min，用1％三氯乙酸定容至刻度。充分混匀后，静置，过滤，滤 19.2 根据洗脱液中三聚氰胺的浓度用甲醇溶液（17.4）进行三聚氰胺标准系列同步净化。 19.3 入400 μL的吡啶和200 μL衍生化试剂，混匀，70℃反应 20 测定步骤。监测离子 m/z：99、171、327、342。条件见附录 D。各 1 μL 注入气相色谱质谱联用仪中，单点校准，按外标法，以峰面积积分值量 20.2 准溶液相对离子丰度的最大允许偏差不超过 20％。三聚氰胺标准图谱见附录 E。 20.2 m/z327）峰面积进行定量。 21 结果计算 21.1 试样中三聚氰胺含量（mg/kg）按式（3）计算 .1 固态乳制品试样充分混匀，称取2 g (精确至0.01 g) 样品于50 mL具塞比色管，加入25 mL1％三氯乙酸溶液，漩涡振荡30 s，超声提取30 mi 静置，过滤，滤液待净化。 .2 液态乳制品及酸奶称取10 g (精确至0.01 g) 样品于50 mL具塞比色管，加入25 mL1％三氯乙酸溶液，漩涡振荡30 s，超声提取30 mi 液待净化。净化依次加入3 mL甲醇、3 mL水活化固相萃取柱，准确移取适当体积数的待净化滤液上固相萃取柱，控制过柱速度在1 mL/min以内，再依次加入3 mL水和3 mL甲醇淋洗固相萃取柱，抽近干，用3 mL甲醇氨水溶液洗脱，收集洗脱液于50℃氮气吹干，适当稀释。同时衍生化准确移取一定量洗脱液，用氮气吹干，加 30 min。同时三聚氰胺标准系列同步衍生。 20.1 质谱条件 20.1.1 传输线温度：280℃。 20.1.2 扫描范围：60 m/z～400 m/z。 20.1.3 扫描模式：选择离子扫描 20.1.4 离子源温度：230℃。 20.1.5 EI 源轰击能：70 Ev。 20.1.6 色谱 20.2 测定 20.2.1 工作曲线的绘制吸取系列标准工作液定量，绘制工作曲线。 20.2.2 定性与定 .2.1 定性通过样品色谱图的保留时间与标准品的保留时间、各色谱峰的特征离子与相应浓度标准品色谱峰的特征离子相对照定性。试样与标准品保留时间的相对偏差不大于 5％，特征离子的相对丰度与标的相对丰度一致， .2.2 定量采用外标法以定量离子（计算式中：食品伙伴网http://www.foodmate.net

广东轻工职业技术学院 标准 乳及乳制品中三聚氰胺的测定

广东轻工职业技术学院标准乳及乳制品中三聚氰胺的测定