1G867.120.30 B50 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T20361一2006 水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定 高效液相色谱荧光检测法 Determination of malachite green and gentian violet residues in fishery products- High performance liquid chromatography with fluorescence detector 2006-06-21发布 2006-09-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检按总局 中国国家标淮化管理委员会 发布
中华人风共和国 国家标在 水产品中孔雀石绿和结昌紫残留量的测定 高效液相色请荧光检测法 G用/T20161一2006 中国标准出烈社出酸发行 北京复兴门外三里阿北街16号 与改编月：100045 冈址www,bzcbs.com 电话：685204666517548 中国标准也短杜素皇岛印酬厂印刷 各准鲁埃书店经明 开本840×12301/16印张点5字数9千字 206年9月第一烈2086年9月第一收印别 如有印装差锡由本社发行中心调换 版权专有侵权必究 #握电话：(010)68533533
GB/T20361-2006 前 言 本标准的附承A为资料性阳录： 本标准由中华人民共和因农业部翼出。 本标雀由全国水产标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：中国水产科学研究貌，农业部海业环境及水产品质量监督检验测试中心（舟山）， 国家水产品质量监昼检验测试中心，农业部水产品质量监校验测其中心（上海）， 木标准主要起草人：郑域，赵红拌，冷氙良、刘士忠、于慧机，秋霞，陈雪昌，察友琼、黄冬梅，钟岁， 冯植宾
GB/T20361-2006 水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定 高效液相色谱荧光检测法 1范围 本标准规定了水产品中孔雀石绿(Malachite green,MG)及其代谢物隐色孔省石绿(Leucoma chite green.LMG)残冒总量，结晶常(Gentian violet,GV)及其代惠物隐色轴昌紫(Leucogentian violet, 1GV)我留总量的高效藏相色#费是利定方齿。 本标准适用于水产品可食那分中孔雀石绿和结品紫我阻的刻定， 2规范性引用文件 下列文件中的%款通过本标坐的引用面成为木标霍的条款，几是往目期的用文件，其随后所有 的修政单（不包括粉误的内容）或修订戚均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达发协议的各方研究 是否可使用这些文件的最斯极本，凡是不往山期的引用文伊，其最新本述用于本标指。 GB/T582分析实粒室用水规格和试段方去(GB/T6682一1992，ne9S03695:1987) 3原理 样备中残圆的孔雀石绿或结品紫用腰氢化钾猛原为其相应的代避产物总色孔蛋石绿或隐色结品 常，乙睛·乙酸按复中帮合液提取，二氧甲枕被浅萃取，州扣萃取柱净化，反相色语柱分离，变光检测器检 调，外标法定量， 4试剂 除另有规定外，所有试刘均为分标苑，述验月水应荐合GBTG682一极水的标准. 4.1乙睛：色谐纯 4.2二氧甲妃. 4.3酸性氧化相，分析袍，粒崔0,01mm一0.150mm, 4,4二甘醇。 45丽氢化钾。 4,6无水乙酸校， 4.7冰乙酸. 4,8氨水， 4.9翻氢化年格液[0,03ml/L]:称取0.05g丽氢化虾丁烧杯中，加250L水溶解，现E现用. 4.10解氢化钾溶液[0.2alL]:称取0,54g鞭氢化钾于烧杯中，知0mL水席解，凳配现用。 4.1120%盐酸经按溶被，物解12.5g盐及经胺在50m1水中， 4.12对-甲孝碳酸容浪[0.5mol/L]:称取0.S5g对-甲米硝酸，用水骨释至100mL 4,13乙酸皱缓溶液[Q1md/L门，称取7.7孔g无水乙酸技溶？于1000mL水中，氨水调pH到1a0, 4.14乙酸陵逐神溶液[0.125al/L]:称取9.64g无水乙酸按溶解于1000ml水中，冰乙壁到pH 到1.5。 4.15酸性氧化幅同相萃取柱：500g,3=L,使用前用9mL乙精法化. 4.16Vari1nPRs柱或相当者：5008,3mL。使月前用5mL乙特话化. 1
GB/T20361-2006 4,17标准品：孔雀石绿(MG)分子式为[(CHN,)(C,HO,)]C:0.结品紫(GV)分子式为 Cs HnCIN,幢度大于98%， 4.18标座铅备落液：准跨称取适悬的孔宿石绿，结品紫标法品，用乙背分别配削成10g/mL的标准 贮备液。 4.19程合标虎中向液(1/mL》:分别座隆级取】，00ml孔蜜石绿和结品紫的标准储备籀流至 1C0ml容量瓶中，用乙精榨释至剂度，配制成1g/L的混合标准中间格粮。一18℃建光保存。 4.0要合标准工作溶液，根据荷，首用时准隆吸取一定量的混介标准中可溶液，加人露氢化钾溶液 (4.9)0.40mL,用乙1准确码释至200mL,配到适当花度的合标工作液. 5收器与设备 51高效藏相色带仪：配荧光检测器， 5.2匀浆机. 5.3离心机：4000/mi加， 5.4旋润振将器， 5.5周相萃取袋竖. 5.专旋转盛发仅。 5样品制备 6.1取样 鱼去朝，去皮，沿骨脊取肌肉都分：虾去头，壳，畅黎，取肉部分：显，印鱼等取可食都分。样品切为 不大于0.5cm×0,5m×0,5m的个块后混合， 6,2提取 称取5,00g样品于50mL离心管内，知人10mL乙睛，100C0/mln匀装提数308，却人5g殷性 氧化部，振落2min,4000r/min离心10mn,上清液转移至125mL分液年中，在分液稀斗中超人 2ml二甘醇，3mL氧化钾宿森(4,10)，报超2mB。 另数0ml离心管知人10mL乙驶，洗缘匀浆机刀头103，优涤液移人前一离心管中，如人3mL 氢化钾溶液(4.10)，用度捧场肚南心管中的训淀并侵匀，激街混匀带上紫荡1mn,静量20m, 4000/min离心10min,上清液并人125mL外液阁斗中. 在50mL离心骨中怒续加人1.5mL盐酸经盛溶液(4,11)，2.5mL对甲苯碳酸溶孩(4,12》、 5,0mL乙酸按级冲溶线(4.14)，餐商2ein,再扣人10mL乙部，湛续探尚2min,40o0r/min离心 10mm,上清液并入125mL分液斗中，重复上连操作一次， 在分能漏年中如入20回L二氯甲烧.具塞，瓶板摇2mi,静量分层.将下层溶液转移至250mL 茄形框中，整续在分薇附斗中如人5ml乙睛、10ml二氧甲烷，基招2mi,把全部溶液转移至50ml. 离心管，4000r/ma离心10min,下层溶液合并至250mL非形瓶，5℃旋转燕发至近干，用2.5mL乙 睛溶解残透， 6.3冲化 将PRS柱安装在固相萃取装置上，上端连接酸性氧化铝国相车取柱，用5四L乙精活化，转移是取 液到性上，再用乙睛流茹形瓶两次，物次2,5mL,然欢过柱，靠去能性氧化铝桂，吹RS柱近干，在不抽 真空的情况下，知人3ml等体积混合的乙睛和乙酸饺溶校(《.13)，收集选锐线，乙醇定容至3mL,过 0,5m使眼，供敲和色普测完， 7测定 7.1色谱景件 7.1.1色情桂：0D3Cm柱，250mm×4.5mm(内径)，粒度8m 2
GB/T20351-2005 7.1,2瓷动相：乙睛+乙酸货缓冲袍藏(0.125mal/L,日4.5)=80+20. 7.1.3这：l.3ml/min. 7.1.4柱温35℃. 7.1.5資发坡长：265nm, 7.1.6发射数长：360nm. 7.1.7进样量：20L. 7,2凸请分析 分别能人0L孔雀石绿和结晶紫混合标准工作溶被及杆品提取旋于液相色谱仪中，按上遥色请 条作进行色谁分析，记录蜂面积，响应算均皮在仪”修剩的线性范国之内。限指标准品的保冒时间定 生，外标法定量。标堂品色带因参见闲及A。 8结果 8.1计算 样品中孔备石绿和结品紫的残留量按式（小）计算。 X-A×GXy 444…气1） A,X丽 式中： X一样品中符圈组分残简量，单位为毫克每千克(mg/g》: G,一作测组分标常工作孩的浓度，单位为微克每毫升μg/mL》: A—样品中持测组分的蜂面积， A,一待测组分标准工作液的蜂而积： V—样被最修定容体积，单位为毫升（回L》: m一样品质，单位为克()， B.2服性移国 孔鲨石绿和结昌紧程合禄准常粮的就性范图：0.1g/ml一的0g/回L 83检出限 本方法孔富石绿.结晶黛的检出限均为0,5gkg 8.4回牧率 在样品中泽加0.4g/g一1C0gkg不衔石绿时，回枚率为70%一110%. 在样品中桥加04g/g一100gkg姑品紫时，回收岸为？心%一110%。 85重复性 本方法的相对标在偏差≤155
GB/T20361-2006 附录A (资料性附录) 孔雀石绿(MG)和结品紫(GV)混合标准的液相色谱图 26 50 .5 10.0 525 图A.1 浓度为0.01g/m孔雀石绿(MG)和结品紫(GV)混合标准的液相色谱图 版权专有促权必究 书号：155066·1-28119