1Cs67.040 C53 中华人民共和国国家标准 GB/T5009.46-2003 代蒂GB/T5009.46-1996 乳与乳制品卫生标准的分析方法 Method of analysis of hygienic standard of milk and milk products 2003-08-11发布 2004-01-01实施 中华人民共和国卫生都 中国国家标准化管理委员会 发布 385
GB/T5009.46-2003 前 言 本标准代整GB/T5G03,46一195乳与乳品卫生标遂的分析方法》. 本标准与GB/T5009.45一1996相比主要修改如下， 按辍GB/T20001,4一2001《标座输规用第4部分：化学分所方法》对原标准的结背进行了 修改。 本标准自中人民共和国卫生留提出井归日， 本标准由飘龙江省卫生防疫始、上海市食品王生监督检登断，卫生部食品卫生监督检验所负餐 起草。 本标宝于1985年首次发和，1996年葛一次修订，本次为第二次修订
GB/T5009.46-2003 乳与乳制品卫生标准的分析方法 1范图 本标霍规定了乳与乳制品中各项卫生指每的分析方法。 本标准适用于乳与乳制品中各项卫生指标的分析， 2规范性引月文件 下列文件中的条款通过本标湘的引用面成为本标准的条款，凡是注日期的引用文件，其随后衡有 的修改单（不包括影烫的内幕）攻修钉密与不超月于本标准，格罪，登热根据本标座达皮协议的各方纤究 是香可使用这些文件的最新质本。凡是不注日期的引用文件，其量新板本适月于本标准。 GB/T5009,8食品中水分的衡定 GBW/T5009.7合品中还原斯的定 GB/T009,8食品中莲帮的制定 GB/T5009.12食品中铅的制定 GB/T009.13食品中别的测定 GB/T5009.16度品中偶的测足 GB/T5009.17食品中总求及有机求的测定 GB/T5000.19食品中六六大，药商第我圆量的测定 消毒，灭菌乳 适月于经巴氏消海和其枯工艺削成的丽霉，灭西乳各项卫生指杨的测定， 3盛官检查 按有关精毒，灭菌乳卫生标准的要求进行检查， 4理化检验 4.】相对密度 本标雀规定牛乳密度为的牛乳与同件积4℃水的爱量比值。 4.1.1仅整 4.1.1.1乳网计，有0℃/4℃及15℃/15℃两种，崔者较后者测得的结果纸2℃. 4,1.1.2玻璃图简成09mL一25GmL量简，图镜高度应大于乳到计的长度，其直径大小应使在沉人 乳得计时其周边和阅简内整的距离不小于5mm, 4.1.2分折步置 取推匀井霄节型皮为10℃一25℃钓试样，小心问人容积为250mL的玻璃圆简内并加到容积的四 分之三，勿使发生泡浓并测量试样程度。小心将乳票计沉人试样中到相当刻度3动处，然后让其自然浮 动，但不能与简内继接触。价置2一3m,限韩对准简内牛乳液面的高度，读出乳铜计数值。根据试样 的涸度和乳朝计读数查表1换算成的℃时的度数。相对密度()乳特计刻度关系式： X=(-1.900)X1000 n*nm44一(】) 167
GB/T5009,46-2003 式中： X一一乳稠计读数： P”一一试样的相对密度. 当用20℃/4℃乳期计，驾度在20℃时，读数代入公式(1》相对密度即算出：测量时不在20℃要查 表1换算成20℃时度数。再代人公式(1)， 计算标例：试样祖度为18℃，使用20℃/4C乳玛计，读数28°，得柜对密度为1.28：换算成20℃时 相对密度，查表1(18℃，28读数)应为27.5”，20℃时的相对密度为1.0275. 4.2酬防 4.2.1哥特黑一罗紫法 4.21.1原且 利用氢溶液使乳中酷蛋白的钙盐戏为可席性钙蛰，使结合的相助酵离，用乙醚从乳中提取盥助，干 燥至每量，称其质量得乳中货防食量， 4.2.1.2试刺 42.1.2.1氢水. 4.2.1.2.2乙。 4.2.1.2.3乙. 4.2.1,2.4石泊位：第程30℃一60℃。 4.2.1,3位话 轴醒框：内径2.0em一28m,密机10的mL.见图1. 4.2.1.4分折步骤 吸取10,0mL试样于拍指南中，包入1.25mL氦水，充分混匀，置60℃水搭中加待5mn,厚振招 2min,都人10ml乙醇，充分相匀，于冷水中冷却后，知人25mL乙能，振相0,5min,知入25mL石怕 健，再板摇0,5mi,静置30mn,待上.层液纽清时，读取健层体积，放出健层至一已恒量的烧厘中，记 录体积，藏馏同牧乙随，置绕点于98℃一100℃干提1h后称量，再量8℃~100℃干燥0,5h后称量，直 至前后两次爱量相差不超过1.0世8， 4.2.1.5抽果计算 试样中阳助的含量按式(2)过行计算。 X-气世×100 X可 式中： X一一试样中脂韵的含量，单位为克每百克(g/10的g》: 两一绕所加图秒质量，单位为克(g): m一一烧压质量，单位为克(g): 一一试样质量（吸取体积乘以牛乳的相对些度），单位为克(g): V。一一读取乙健层总体积，单位为毫升（回L V,一较出乙融层体凯，单位为毫升（回L)。 计茸结果保髓两位有效数学。 4.2.1,8精密 在重复性条件下获得的两次珠立测定结果的绝对差值不得如过算术平均值的5%。 365
GB/T5009.46-2003 图1 表】乳调计读数转烧为遇府20℃时的度数换算表 解乳温度/代 乳网计读数 10 11121314516171819012223245 25 28323523621.723.924.024,224.424.624.25.05.25.425258240 26 24224.424.24.724.325.025.22542562线824.0M.22城，426626827,0 27 25.125.125.425,625725,92612452%.57.07.227.525.727.521 28 2024.124.324.320.026.827.027.327.527,528.028.228,5272.03,2 29 28.27.127.327.527.627,82B.02832852a82a,029.229,527303%2 30 27,928.128.328,528.82882线02线.32绕，59.80.030,230538731.03L.2 31 2a823.024.229,49,629,83003航3额5,431,0L,231.531.7320起.1 32 29,330,030,23n,430630731.01.231,53L.832032332.53.833.013.3 33 0.7.8L.13L.33L531732032,22.2,8过.03.38531434,14.3 3别 3L.71L.9J2.1J233k532.703.23.533.834034334.481.85.136.3 85 2.512.833.13333k533T81.034.234.534.715.035335.535.85.136.3 6 33.538834034.331.934.734.95.235.635736036.235.s5.737.037.3 4.22盖勃氏法 4.22,1原理 在牛乳中如人镜酸被坏牛乳胶质性和覆差在脂贴球上的蛋白质外痕，商心分离南斯后测量其体积， 4.22.2试利 4,2.之2,1整酸：相对密度1,820一1,825. 4.2.22.2异戊醇. 4.2.23仪图 4.2.2.3.1乳期离心机， 4,2.之3.2盖物氏乳指1f:最小刻度值为0.1%，见图2. 360
GB/T5009.46-2003 图2 4.2.2.4分析步深 于乳番计中先如入10mL花酸，再沿奢管壁小心准璃加入11mL试样，使试样与馥酸不要混合，格 后加1mL异戊醇，塞上橡皮塞，使瓶口向下，同时用布裹以防冲出，用力探每使虽均匀棕色液体，静置 数分钟（瓶口向下），置65℃一70℃水裕中5mn,取出后放乳酯离心机中以1000/mn的转速离心 5m加.再置5℃~0℃水游水中，社意水爷水面应高丁乳脂计斯防层，5m后取出，立即读数，即为脂 助的百分数， 42.3巴布科克氏法 原理，试别同4.2.2.1和4.2.2.2， 4.2.3.1仅福 4,2.3.1.1乳脂离心机， 4,2.3.1,2巴布科克氏乳服框：见图3， 里3 4.2.3.2分析岁骤 在骑吸取17.6mL试样，倒人已寿科克氏乳脂点中，再收17.5mL硫酸，沿原颈厦耀德人瓶中，将 航颈回旋，使充分混合，至星均匀惊色线体。置乳指离心机上，以约10O0:/mm的转速离心5mn,取 出，置0℃以上水格中，如人0℃以上的水至瓶孩基部，辉置离心机中离心2m,取出后再置0℃水 沿中，加入80℃以上的水室胞秽浮到2或8剩皮处，再置离心机中离心2m,取出后置55℃~60℃水 誉巾，5mn后，京出立即读数，即为指防的百分数， 4,2.4伊尼君夫氏碱法 4.2.4,1原理 月4.2.2.1. 4.2.4.2试剂 370
GB/T5009.46-2003 4.2.4.2.1能溶液：称取15g氢氧化纳，加150mL水使溶解，另称取20g无水碳酸防，加200mL水 使溶标。再取37.5g氧化钠溶于水后，将此三被混合并加水稀释至300mL,以脱西棉过德，贮存于带 橡皮寒技璃瓶中， 4,2.4.2,2异戊停-乙醇混合藏(5+105). 4.2.4.3位借 签轴氏乳斯计：如图2所示 4.2.4.4分析步限 取益物氏乳账计，小心如人10mL就溶液，再加人11m以试件与1mL异戊醇-乙霉混合液，用特制 檬皮塞塞紧，小心摇匀，至产生泡滨为止，将塞向上，放入70℃~73℃水浴中，如置10mi,5min后小 心振摇一次，待10min后取出，将其反转使塞向下，再于70℃一73℃水溶中静置10in~15min(时何 长短取决于泡袜清失的速度)，然后取出读取其脂防层读数，即为雪防的百分数。 4.3消岛效黑试验（磷酸酶测定》 4.3.1原理 生牛乳中含有编酸醉，它能分解有机商酸化合物成为磷酿及原来与醉酸相结合的有机单体，牛乳 经消春后，辞酸酶失其效用，在同样条件下就不能分解有机嗣陵化合物。利用苯基磷酸双纳在藏性级冲 溶液中被璃酸酶分解产生苯附，养层再与2,8双浪假氯除按起作用显蓝色，蓝色深浅与苯卧含量成正 比，母与消香的完苦与否成反比. 4.3.2试剂 4.3.之.1中经丁舒，佛点15C一118℃. 4.3.2.2言物氏试剂，称收0.042,6-双溴醒氢能胺溶于10mL乙醇中，置棕色瓶中于冰箱内保存， 箭用时新配， 4.3,2,3圆酸盐缓冲液：称28472g图酸钠(NaB0·10H,0》:游于900mL.水中，加玉27g氢氧化 钠或81.75mL氢氧化销溶液(40/L),如水释释至】000mL. 432.4缓冲基质溶液，称取0.05g苯某裤敌双钠结品，溶于10mL陂盐缓冲溶液中，加水解释至 10的mL,性用时配制， 4.3.3分析步综 限取Q50mL试样，置带塞试管中，加5mL缓冲基质溶液，相握摇后置36℃~44℃水裕戏堵养等 中10m,然后韶6黄吉幼氏后试剂，立即挥匀，静置5mn,有共色出乳表示情春处理不够，为增箱灵 敏度，可如2mL中性丁醇，反复完全制转试管，每次倒特后稍停使气泡支裂，分出丁醇，然后税察结果， 奔同时做空白对服试验， 44物碱试验 4,4.1原理 解乳中如如碱，可使澳班香草附蓝指示剂变色，出颜色的不同，判断加碱量的多少， 4.4.2试朝 浪霜香草酯蓝-乙醇溶液(0,4/1) 4.4.3分析步母 量取5m山.试样，置试管中，将试管保持倾斜最置，沿管整小心椒人5滴议雨香享附戴-乙醇溶液 将试管轻轻顺斜转2回一3回，使其更好地相互接触，切勿使液体相互混合，然后将试管垂直故置， 2m后根据环层督示刻颜色的特任确定结果，同时用未掺赋的鲜乳殿空白对黑试验。 按孙层积色变化界限判定结果，见表2， 371
GB/T5009,46-2003 表2 年乳中合孩监氢 解乳中含版酸氧 的的装度() 接图环尽肌色特任 接面环层膜色作任 钠的度/八⅓) 天 黄色 0.50 有绿色 0,0 黄绿色 0.70 快青色 0.6 钱绿色 1.0 青色 Q.10 绿色 15 保青色 Q30 保保色 4.5非指因体 4.5.1甲法 4,5.1.1操作方法 取直径5cm-7cm的装第n,如20g精制陶砂，在95℃~10S℃千燥2h,于干燥器冷却0.5h,称 景，并反复丁燥至恒量，称取5.0L试样下恒概的且内，称量，置水誉上露干，擦去血外的水被，了5℃ 一105℃千燥3h,取出放干领器中冷却0.5h,称量，再于95℃-105℃干燥1h,取出冷却后称量，至前 后两次质量相兼不却过1.0mg。 4.5.1.2结果计算 4.5.1.21试样中总固体的含量按式(3》进行计算. X-1二：×100 一陶 式巾： X-一试样中总图体的含量，单位为克每百克(g/100g》: 一一正和得砂加试样干燥后质量，单位为克(g》: m,一且和得砂质量，单位为克(g): m一一正和得砂加样量质量，单位为克(》， 4.5.1.22试样中非常固体的食量按式()进行计算。 X■X一X 558行1445144号=《4】 式中， X一试样中非西国体的含慧，单位为克每百克(g/100g): X一试样中总固体的含量，单位为克转百克(g/100g) X:一一试样中脂勒的含量，单位为克每百克(g/1O0), ,计算结果保留两位有效数字。 4.5.1.3精密度 在重复性条件下佼得的两次驻立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的5⅓： 4.5.2乙法 利用式(5)和式(4)，可由上述断测得的乳调计读数及脂助含量计算总圆体的含量。 X,=0.25X+1.2X:+0.14 式中， X,一试样中总园体的含量，单位为克每百克(g/100g): X一一乳牌计上刻度读数： X:一试样中图防的含量，单位为克每百克（微/100》. 如用20℃/4℃乳琴计时，应将测得的读数如上2”，然后按式(5》针算， 试样中零脂固体的含量按式(》计算， 4.6酸度 4.6,1原显 新解正常的乳酸度为16T一18”T,乳的酸度由于微生物的作用面增高，酸度(T)度数是以酚酞 3程
GB/T5003.46-2003 作指示剂，中和100mL乳所需氢氧化钠标在痛定溶孩(Q.1000正l/L)的毫升数， 4.6.2试别 .6.2.1卧酞指示载：称取0.5g略量，用少量乙醇辟解并定客至500mL. 4.5.22氢氧化纳标准满定溶液C(N.OH)=0,1m/L]. 4.6.3分析步雪 准境吸取0mL试样于150mL管形瓶中，加2的mL经靠德冷掉后的水及数流龄酞指示液，层匀， 用氢氧化钠标准溶液(0.10mal/L》滴定至糊现粉虹色，井在0.5mi加内不绿色，填耗的氢氧化纳标准 满定溶液(0.1000©l/1)毫升数乘以10即为酸度(T). 4.6.4精密度 在重复性条件下获得的两次数立病定结果的绝对差优不得翅过Q,5L, 4.7大六六.清清漂 按GB/T5009.19操作. 4.8康 按GB/T5009.17操作. 49黄由每喜素M(柱色德纯化-薄层测定简易法) 49.1原理 试样经用丙阴沉淀蛋白质，扣人防乳化的氯化钠帝液后，用三氧甲妃提取黄由霉毒素M:再通进 硅胶H色进柱级附，用正己烷和乙融去晚脂防及杂质，然后用丙丽氧甲烷鸳合液洗脱卷索，进行蒂层 测定，与标准比较定量 4,9.2试剂 4,9.21硅整H:一般用于柱色灌填充物，80目一1的日，用于薄层色请200日以上 4.9.22甲醇. 4.92.3丙阴. 4.9.2.4三氧甲烧。 4.9.2.5正已烷， 49,2.6乙醇：不含过氧化物。用稿化鲆溶液检壶，应不显现黄色： 4.9.2.7氯化钠和氯化钠溶液(40g/L). 4,9.2.8无水成酸销。 4.9.29梳酸(1十3)： 4.9.2.10赞曲母毒素M标准使用族：用三氧甲统配制每燕升相当于0.10g黄由荐毒累M,置4℃ 休箱泥光保存。 4.9.2,11度甲基纤峰素钠(C3MC)溶液(4/L):配利时应取经2000r/min离心10min后的上请液。 4.9.3位昌 4.9.3,1365nm紫外光灯， 4.9.3.215m×5cm破南板. 4.9.3.3展开槽：内长25cm,内宽6.5cm,内高3.5cm, 4.8.3.4藏量往射行5L,50L 4.9.3.5层析柱：内径1.5m.柱高20cm,具有砂苍段话察， 4.自.36浓缩装置，带刻度支管旅增厘， 4.9.4分桥步理 4.9.4.1试样提取 称取30.00g均匀试样，置于250m1.具塞到氧内，加入50L丙制置振高器内器摇3动mn后， 373
GB/T5CC9.46-2003 用健怎进人50mL分液霸斗中，德渣阳钓5mL丙翻淋洗，瓷液并人分液丽斗内，然后加人3和ml,三 氧甲烷及20mL氧化钠溶液《4g/L),显丝2m,静量使分层，下层液道过盛有钓10g无水镜酸钠的快 速使纸战人10m山，性愁租内，再用少量三氧甲烷淋洗无水镜酸钠，徒液并人维形瓶内，置于5℃一 0℃水带上被馆直至三氧甲烷，丙酮全部界散。 4.9,4,2试样净亿 4.94.2.1层析柱的制备 4.9.4,2.1.1硅胶日的处建 称取约0？硅胶H(可按试样的数量前定)，先用甲醇复没并用玻璃排拉动，洗缘后抽千，挥用三气 印烷浸径，同样授动洗涤抽于，特有机溶对完全挥下后，置110℃烘箱干绿1，取出，敢入瓶中置干樱程 内：保存备用，时间不超过一周. 4.9.4.2.1.2装柱 称取2。经处理的硅放H,用三氧甲统悬浮，移人已用研悟的无水德酸情材底约Q5cm一】.0cm 高度的层析柱内，待硅胶H桂内完全沉积后，上如2g无水植酸钠履盖，最后让三氧甲烷流至上层无水 硫酸钠处，作用， 4,9.4.2.2柱色谱净化 用0mL三氧甲位分三次将上述试样据取物溶解移人层析柱内，待样放完全从柱内流出后，先用 30mL正己烷分二次洗桂：再用30mL乙储分二次扶柱，弃去洗液，用单纸将柱下管口内外旅净后，用 30mL丙解三氯甲烷视合藏(2+3)分三次邢洗，牧集在球型管支管旅馏管中，然后置于s心一70℃的 水浴上旅缩至近干，再用少量三氧甲烷淋洗瓶壁，继续浓继至干，冷却后加人100L三氧甲烧溶解混 匀，供薄层色进测定用。同时近行坚白杯准时致试2， 4.9.4.3渠层测定 4.9.4.3.1硅救1板的制备 称取1g硅胶H,扭4 mLCMC溶液(4g/L),调成均匀制战，倒于15cm×13cm的玻璃版上，均匀 徐襦整块板面。置于水平位置，在无全条件下使其自然干操，然后置于105℃烘箱内干燥1,5h,取出 冷却，置于干燥驾内保存备用。 49.4.32点攫 在15cm×15cm降层板上厘下据2cm的事线上滴知三个点，即在E离板的左边缘】cm处摘加 3L黄白霉毒常M标准使用液（相当于，3ng黄由霉毒素M,最低检出量），在距商板的右边缘2cm 处满如50L样藏，在标准点与试样点之间再滴加6L.黄自露市常M,标准使用薇（相当子0.6g黄 曲霉毒素M,作定位用》，边演如边欢风，使格刺如快挥发. 4.9.4.3.3展开 4.94.3.3.1纵展 在层析红内如人10mL甲醇-三氯甲烷混合液(6十94)，将点有试样及标雅一增的薄层板插人缸内， 使其桶斜，知盖，展开，待展开刻拟限至板的沿离短点距离10cm处取出，使展开剂白然挥干（约5m》。 4.9.433.2横屏 在层析红内加人10mL乙醚，将氯展臀干后的得层板使点有标准的长边一婴机插人缸内，使其领 斜，加盈，展开，待情展东板塔后过5mn取出，使展开剂自然挥干后戏察（如需要时可继续晨开一次）， 4,9,4.34现察结果 在繁外灯下晨黎层析板，如板上试样点与标产点于相同位置上出现相同蓝繁色荧瓷点，即过一少进 行确证试程，如试杆点不出现蓝紫色费光，则试样中黄由霉毒累丛音量在其所定的最低检出量以下， 可作未检出处理， 4.9.4.3.5确正试验 在试样出呢蓝紫色荧光的板上均匀喷以疏破(1+3》，使板微湘，家温数置5m血后雅续在霖外灯下 374